[发明专利]一种无饲养层无血清培养小鼠精原干细胞的体系及方法在审
| 申请号： | 201810673342.8 | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN109055306A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 白银山;朱翠;刘珊珊;冯美莹;詹小舒;王丙云 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 广东广信君达律师事务所 44329 | 代理人： | 杨晓松 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 饲养层 小鼠 小鼠精原干细胞 无血清培养 无血清 多聚赖氨酸处理 细胞生物学领域 精原干细胞 饲养层细胞 表达水平 促进作用 基因表达 培养材料 培养体系 实验优化 条件下体 相关基因 小鼠生殖 自我更新 生长 干细胞 上清液 特征性 干性 体外 贴壁 增殖 添加剂 制作 | ||
1.一种小鼠精原干细胞的培养体系，其特征在于，所述的培养体系无血清、无饲养层，但需要Mef细胞培养上清液。
2.根据权利要求1所述的培养体系，其特征在于，所述的Mef细胞上清液含有Mef细胞分泌因子和外泌体等，可以支持小鼠SSCs体外自我更新。
3.根据权利要求2所述的培养体系，Mef细胞上清液该体系中的体积百分比为8～12％。
4.根据权利要求2所述的培养体系，Mef细胞上清液该体系中的体积百分比10％。
5.根据权利要求1所述的培养体系，其特征在于，含有以下的组分：
6.根据权利要求1所述的培养体系，其特征在于，含有以下的组分：
7.根据权利要求1-6任一所述培养体系，其特征在于，所述的Mef细胞上清液制备方法为：在含10％FBS的DMEM完全培养基中接种Mef细胞，待细胞长至85-95％时，加入终浓度10μg/mL丝裂霉素C，黑暗条件下培养4h后，PBS洗涤三次；加入95％Stro-34培养基+1％ITS+55μMβ-巯基乙醇+2％B27+1％L-谷氨酰胺+20ng/mL GDNF+10ng/mL EGF+10ng/mL bFGF+1000IU/mL LIF+1％Penicilin-Stretomycin的培养基培养24h，后0.22μM滤器过滤，4℃保存，2周内用完。
8.一种培养小鼠精原干细胞的方法，其特征在于，包含以下步骤：
(1)利用0.01～0.06％多聚赖氨酸铺板处理；
(2)加入权利要求1-6任一所述的培养体系；
(3)再接种0.8～1.2×105个/mL小鼠精原干细胞后；
(4)在5％CO2和37±1℃的条件下进行培养22～24h后，采取半量换液，换液后培养5～7d。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，采用0.01％多聚赖氨酸铺板处理。
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