[发明专利]一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1) 聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液的制备：

将甲基丙烯酸缩水甘油酯GMA、二乙烯基苯DVB和苯乙烯St加入三口烧瓶中，随后加入双蒸水并插入温度计和氮气导管，在氮气氛围下持续搅拌并加热；当温度达到71 ℃时，加入过硫酸钾溶液引发聚合，反应一定时间后，将产物通过离心分离，并用乙醇与双蒸水对产物分别洗涤，随后将产物分散于双蒸水中，得到聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液，备用；

(2) 表面螯合Cu²⁺聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu²⁺的制备：

在三口烧瓶中分别加入亚氨基二乙酸IDA和NaOH，随后加入步骤(1)中得到的聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液，超声分散后用NaOH调节溶液pH，并将烧瓶置于水浴中，加热反应一段时间后，将产物PSG/IDA通过离心分离并用双蒸水洗涤至中性；将洗涤干净的PSG/IDA分散于双蒸水中，加入CuSO₄搅拌溶解，并于室温下反应过夜；最后将蓝色的PSG/IDA-Cu²⁺用双蒸水洗涤多次，并在真空干燥箱中干燥至恒重，得到表面螯合Cu²⁺聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu²⁺；

(3) 双重识别位点表面印迹纳米材料PSG-MIPs的制备：

将步骤(2)中得到的表面螯合Cu²⁺聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu²⁺和模板蛋白卵清白蛋白OVA加入烧瓶中，随后加入磷酸PBS缓冲溶液，超声分散后静置，使卵清白蛋白OVA通过螯合作用于粒子表面；而后离心分离并用PBS缓冲溶液对分离出的粒子洗涤多次，直至洗涤液中无法测试出卵清白蛋白OVA；将洗涤后的粒子再次分散于PBS缓冲溶液中，并加入3-氨基苯硼酸APBA，搅拌溶解后缓慢滴入过硫酸铵溶液，室温反应一段时间，将产物离心分离，并用无水乙醇与双蒸水分别对产物洗涤；随后用含有质量浓度为5% SDS的醋酸溶液洗涤产物多次，直至用UV-vis光谱检测不到卵清白蛋白OVA的吸收峰，最终产物用双蒸水洗至中性，并且真空干燥，得到双重识别位点表面印迹纳米材料PSG-MIPs。

2. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的GMA、DVB、St的用量分别为1.5-3.0 mL、0.05-1.0 mL、0.2-0.6mL。

3. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述加入过硫酸钾溶液的量为1.5-2.5 mL，浓度为0.03g/mL；所述反应一定时间为6.0-9.0 h。

4. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的IDA、NaOH和聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液的用量分别为 1.0-2.5g、1.0-1.5g、100mL。

5.根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述NaOH调节溶液pH为碱性；所述加热反应温度为70-90 ℃，所述加热反应时间为10-14 h；所述加入CuSO₄量为1.0-3.0 g。

6. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的步骤(2)中得到的表面螯合Cu²⁺聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu²⁺和卵清白蛋白OVA的用量分别为 40-60 mg、5-15 mg。