[发明专利]一种联合HA促进毛发再生的干细胞新型生发剂

权利要求书

1.一种联合HA促进毛发再生的干细胞新型生发剂，其特征在于：包含KGF、PDGF、VEGF、透明质酸溶液。

2.根据权利要求1所述的联合HA促进毛发再生的干细胞新型生发剂，其特征在于：所述KGF、PDGF和VEGF的含量为320μg/ml、120μg/ml和180μg/m。

3.根据权利要求1所述的联合HA促进毛发再生的干细胞新型生发剂，其特征在于：质量分数为3K的透明质酸溶液的浓度为0.5wt％。

4.制备权利要求1-3之一所述的联合HA促进毛发再生的干细胞新型生发剂的方法，其特征在于：步骤如下：

⑴脐带间充质干细胞的分离：获取无菌的脐带组织，无菌条件下剥离脐带组织的外膜和脐带组织内动、静脉，分离出脐带华通氏胶并剪碎至2-3mm3，将剪碎的华通氏胶贴于培养瓶底面，1-4h后向培养瓶内添加适量培养液，培养液采用DMEM/HAM’SF-12+10％FBS；

⑵脐带间充质干细胞的消化、传代，待脐带间充质干细胞长至80％时，采用0.05％的胰蛋白酶+0.02％的EDTA对其进行消化，以10000cells/cm2传至新的培养瓶中，继续培养；

⑶UC-MSCs培养至P3代，待细胞长至70％时用磷酸缓冲液清洗UC-MSCs，将培养UC-MSCs的培养液更换为无血清的DMEM/HAM’SF-12培养基，继续培养72h，收集培养UC-MSCs后的DMEM/HAM’SF-12培养液、1000g离心10min，去除死细胞，作为新型生发剂的原料之一；

⑷对收集到的条件培养基进行蛋白定量检测，确定培养基中KGF、PDGF、VEGF因子的含量，KGF浓度为156.53±56μg/ml、PDGF浓度为76.85±18μg/ml、VEGF浓度为82.73±27μg/ml；

⑸采用低温超速离心的方式对其进行浓缩，超速离心时选用截留3K分子量蛋白的滤网，浓缩后KGF的含量为779.43±23μg/ml、PDGF的含量为289.55±13μg/ml、VEGF的含量为421.51±11μg/ml；

⑹配制HA溶液：采用DMEM/HAM’SF-12培养液溶解分子量为3K的HA，最终配制成浓度为5％的HA溶液；作为新型生发剂原料之一，备用；

⑺采用浓度为0.5％的HA溶解稀释条件培养基，最终制备出新型生发剂，其中新型生发剂中的KGF、PDGF和VEGF的含量为320μg/ml、120μg/ml和180μg/ml。