[发明专利]一种蝉花液体发酵工艺

说明书

本发明公开一种蝉花液体发酵工艺，将蝉花菌种接种于PDA平板培养基中，在28℃下培养2~3d；用接种钩从平板上挑取母种块，接种于250ml的三角瓶中，装液量为100ml的种子培养基中，培养温度为28℃，转速为180r/min的恒温摇床中培养72h得到菌悬液；取5ml菌悬液，接入250ml的三角瓶中进行发酵，将pH值调为6.5~7.4，恒温摇床的温度设为22℃~34℃，摇床转速为110~190r/min，培养时间为5d得到发酵液，测其生物量和虫草酸含量。本发明获得的真菌多糖含量为107.45mg/g，虫草酸含量为95.82mg/g，真菌多糖和虫草酸含量皆高于天然蝉花的含量。

技术领域

本发明涉及植物育种领域，具体涉及一种蝉花液体发酵工艺。

背景技术

蝉花(Cordyceps.cicadae)又称大虫草，目前市面上99％的都是无性型蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)。蝉花属于虫生真菌，与冬虫夏草有非常接近的亲缘关系，都属于菌物界、真菌门、子囊菌纲、麦角菌目、麦角菌科，在我国，蝉花集中分布的省份为四川、江苏、浙江、福建。

根据国内外多项研究成果表明，蝉花具有多种保健作用，包括提高人体自身免疫力、抗疲劳、养肾、养肝、改善睡眠、抗肿瘤、抗辐射和明目等，是一味具有神奇效果的古老中草药。李时珍在《本草纲目》中记载的药效为：“蝉花可治疗惊痫，夜啼心悸，功同蝉蜕”。而且蝉花的天然成分与冬虫夏草类似，具有相同的药用价值，然而像有毒重金属如碘、汞、铅尚等却尚未检测出，在安全性方面蝉花显然优于冬虫夏草，而且蝉花的价格相对于冬虫夏草，则更为亲民，因此蝉花常作为冬虫夏草的替代品。

蝉花的生长条件要求比较严格，需要特定的生态环境和寄主昆虫(金蝉)，这是蝉花资源稀少的主要原因。然而最近几年里随着生态环境的破坏，使得蝉花的生长区域大范围缩小；而且人们开始认识到蝉花的价值，使蝉花遭到了疯狂的采摘，导致蝉花资源迅速减少。本试验的目的是利用蝉拟青霉，在经优化的液态培养条件下生产菌丝体，并对菌丝体的活性物质进行提取及测定分析，以达到通过利用菌丝体发酵来获得天然蝉花含有的药用活性物质，为大规模工业生产提供参考。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供了一种蝉花液体发酵工艺。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种蝉花液体发酵工艺，包括以下步骤：

1)菌种活化：将蝉花菌种通过无菌操作接种于PDA平板培养基中，在28℃下培养2～3d；

2)孢子悬浮液的制备：在无菌条件下，用接种钩从平板上挑取0.3cm*0.3cm的母种块，接种于250ml的三角瓶中，装液量为100ml的种子培养基中，培养温度为28℃，转速为180r/min的恒温摇床中培养72h得到菌悬液；

3)液体发酵：取5ml菌悬液，接入250ml的三角瓶中，装液量为三角瓶的20～80％的发酵培养基中进行发酵，将pH值调为6.5～7.4，恒温摇床的温度设为22℃～34℃，摇床转速为110～190r/min，培养时间为5d得到发酵液，测其生物量和虫草酸含量。

其中，所述PDA平板培养基包括：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g，加水至1L，pH自然，121℃灭菌30min备用。

其中，所述种子培养基包括：土豆200g，蔗糖50g，豆粕5g，KH₂PO₄5g，MgSO₄·7H₂O0.5g，加水至1L，pH自然，121℃灭菌30min备用。

其中，所述发酵培养基包括：蔗糖40g，蛋白胨15g，KH₂PO₄1.5g，MgSO₄·7H₂O0.5g，补水至1L，在121℃灭菌30min备用。