[发明专利]使用了质谱分析的脂质解析方法和质谱分析装置

说明书

本发明为使用了质谱分析的脂质解析方法和质谱分析装置。在无需进行麻烦的衍生化等的情况下，稳定且准确地进行包含脂质的不饱和键位点的位置的确定的脂质结构解析。对捕捉在离子阱内的源自脂质试样的离子照射氢自由基而发生夺氢反应后(S1、S2)，进行前体离子分离(S3)，通过低能量碰撞诱导分解使前体离子解离(S4)。对由此生成的产物离子进行质谱分析并制作产物离子谱(S5、S6)。由于通过上述步骤的解离不会发生氢重排，因此通过在产物离子谱上搜索不饱和键位点的特征性质量差为+12Da的峰对，由此能够确定不饱和键位点(S7、S8)。

技术领域

本发明涉及使用了质谱分析的脂质解析方法、及用于其的质谱分析装置。

背景技术

生物体内的脂质的生化活性很大程度上依赖于不饱和脂肪酸的双键位点(即不饱和键位点)的位置。因此，对于利用了串联质谱分析(MS/MS)法的脂质分析，确定不饱和键位点是重要的。然而，已知的是：以往通常使用的基于低能量碰撞诱导分解(LE-CID)法进行离子解离的串联质谱分析法中，无法充分观测到源自脂肪酸的产物离子峰，难以进行不饱和键位点的确定。相对于此，作为现有确定不饱和键位点的方法已知有如下技术。

非专利文献1中记载了：通过预先用吡咯烷等使源自脂质的样品衍生化并在此基础上利用电子电离(EI)法进行电离，从而可进行特征性表示不饱和键位点的质量差为12Da的源自脂肪链的产物离子的峰对的观测。

专利文献1中记载了：利用如下性质来确定不饱和键位点的方法，向捕捉源自脂质的离子的离子阱内导入臭氧并使其与源自脂质的离子发生反应时，使脂肪酸的不饱和键位点特异性解离。

专利文献2、非专利文献2中记载了利用如下性质来推断不饱和键位点的方法：在利用基于高能量电子照射、高能量碰撞诱导分解的离子解离法得到的产物离子中，不饱和键位点的产物离子的信号强度相对较低。

另外，非专利文献3中记载了如下方法：通过向离子阱的内部照射加速成高速的氦分子而使被捕捉在离子阱内的源自脂质的离子转化为自由基种，通过碰撞诱导分解使该自由基种解离而生成大量脂肪链的产物离子，基于该产物离子的信号强度来确定不饱和键位点。

然而，非专利文献1中记载的方法需要进行预先使样品进行衍生化的前处理而花费工时，而且无法对于不能进行衍生化的样品进行解析。

另外，专利文献1中记载的方法为了不使反应性高的臭氧排出至大气中而需要准备臭氧过滤器等的设备，装置成本增大。

另外，专利文献2、非专利文献2、3中记载的方法均是利用不饱和键位点的产物离子的信号强度相对低于其它位点的产物离子的信号强度这样的现象来推断不饱和键位点的方法，但根据样品的种类、测定条件等不同，还有不饱和键位点以外的产物离子的信号强度更低的情况，因此难以进行稳定的解析。

即，上述现有方法均在确定不饱和键位点方面存在缺陷。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：澳大利亚专利申请公开第2007211893号公报

专利文献2：加拿大专利申请公开第2951762号公报

专利文献3：国际公开第2015/133259号小册子

非专利文献

非专利文献1：安德森(Bengt A.Andersson)、另外1名、“吡咯烷用于质谱测定单不饱和脂肪酸中双键的位置(Pyrrolidides for mass spectrometric determination ofthe position of the double bond in monounsaturated fatty acids)”、Lipids、1974年3月、Vol.9、Issue 3、pp.185-190