[发明专利]一种纽莫康定B0丝氨酸类似物的分离纯化方法

说明书

本发明涉及一种纽莫康定B0丝氨酸类似物的分离纯化方法，所述分离纯化方法包括以下步骤：a)用聚合物基质色谱填料进行第一次层析富集，等度洗脱，收集纯度＞30％部分；b)用亲水作用色谱填料进行第二次层析纯化，等度洗脱，收集纯度＞60％部分；c)用反相硅胶基质色谱填料进行第三次层析纯化，等度洗脱，收集纯度＞80％部分；d)第三次纯化后，纽莫康定B0丝氨酸类似物纯度＞80％的层析液，减压浓缩除去溶剂后冻干，得到纽莫康定B0丝氨酸类似物。通过本发明的制备方法得到的纯度＞80％的纽莫康定B0丝氨酸类似物进行了结构鉴定，为进一步进行生物活性的筛选或对其进行结构修饰后再进行生物活性筛选，奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及一种纽莫康定B0丝氨酸类似物的分离纯化方法，具体地说涉及一种从含有丝氨酸类似物的纽莫康定 B0粗品分离纯化出纽莫康定B0丝氨酸类似物的方法。

背景技术

真菌对于健康人体而言是条件致病菌，正常情况下对人体无害；但当机体抵抗力降低时，就有可能造成局部或全身真菌感染。近年来由于临床上滥用细胞毒性药物、免疫抑制剂、广谱抗生素及激素类药物，不仅患者机体的免疫力受到抑制，而且体内的微生态平衡受到破坏，使得原本不致病的真菌变为优势菌，从而诱发真菌感染；再加上现代医疗中器官移植、介入治疗、插管技术等开放性治疗手段的开展，更增大了真菌感染的发病机率。

按照国际医学界的通行标准，真菌感染可分为浅表性真菌感染、皮下真菌感染和系统性真菌感染。其中前两种真菌感染最为常见，但并不致命，最为严重的是系统性真菌感染，即深部真菌感染，染病后如果不能得到及时有效的控制，往往会危及生命。自从第一个抗真菌药两性霉素B问世以来，人类与真菌感染疾病的斗争已经持续了半个多世纪，现在，人类在预防和治疗浅表性真菌感染方面已取得突破，但对于皮下真菌感染和系统性真菌感染，由于其治疗的难度、真菌的抗药性和现有药物的毒副作用等因素的存在，尚未取得显著进展。现代临床上治疗真菌感染使用的药物主要有两性霉素B和唑类抗真菌药物(如氟康唑、伊曲康唑和伏力康唑等)，但它们在安全性、药代动力学或抗菌谱等方面都存在一定的问题，因此临床上亟待高效、低毒的新型广谱抗真菌药物的出现。

棘白菌素(Echinocandins)，又称棘球白素，是一类新型抗真菌药，属于乙酰六环类，为葡聚糖合成酶抑制剂，可以非竞争性地抑制真菌细胞壁的β-1,3-D-葡聚糖的合成，从而破坏细胞壁的完整性并使其渗透压发生变化而发挥杀菌作用，而哺乳动物细胞无细胞壁，故对哺乳动物细胞无影响。棘白菌素类药物通过抑制真菌体内的葡聚糖合成酶以杀灭真菌，对细胞色素P450无作用，不良反应少，与两性霉素B 和唑类抗真菌药物无交叉耐药性，对人体的毒性低，主要作用于念珠菌属(Candidas)和曲霉菌属(Aspergillus)，也可以作用于寄生虫类病原体如卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)等。

棘白菌素类化合物基本结构类似，都是在乙酰六环的结构上结合有不同的取代基，但不同取代基的化合物抗真菌活性有所不同，经过有针对性的筛选，研究人员发现有些化合物抗真菌活性较强，包括纽莫康定B0(Pneumocandin B0)，WF11899A和棘白菌素B(Echinocandin B)，它们均通过发酵的方法得到，以其作为中间体进行半合成，分别可以得到抗真菌药物卡泊芬净、米卡芬净和阿尼芬净。纽莫康定B0 (Pneumocandin B0)由Zalerion arboricola菌体发酵进行生物合成产生，默克公司以其作为中间体进行半合成，得到了抗真菌药物醋酸卡泊芬净，于2001年2月在美国上市，用于治疗白色念珠菌和烟曲霉菌的感染。

纽莫康定B0(Pneumocandin B0)由Zalerion arboricola菌体发酵进行生物合成产生，属于次级代谢产物。Zalerion arboricola菌体发酵时，除了产生纽莫康定B0，还会产生多种结构类似物。对发酵过程中的结构类似物进行分离，得到单一化合物后直接进行生物活性的筛选，或者对其进行结构修饰后再进行生物活性筛选，有可能得到药效更好、不良反应更少的新化合物。