[发明专利]一种抗体偶联纳米金探针检测SMP30的方法及应用

说明书

本发明公开一种抗体偶联纳米金探针检测SMP30的方法及应用，属于基因工程、免疫学和肿瘤学技术领域。这是一种采用基于纳米金探针的酶联免疫吸附试验用于抗SMP30抗体高灵敏检测的信号放大策略，本探针由HRP酶标记的羊抗人IgG抗体高负载于纳米金表面形成，且稳定性好，易制备。在检测进程中，首先利用基因工程菌表达纯化可溶性肝细胞癌相关抗原SMP30，并以此蛋白作为抗原，分别检测肝细胞癌、肝炎、肝硬化、肝良性肿瘤及正常人血清中抗SMP30抗体的水平。在肿瘤诊断、肿瘤预后与监测的评估中具有较广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程、免疫学和肿瘤学技术领域，特别涉及一种抗体偶联纳米金探针检测SMP30的方法及应用。

背景技术

肝癌是世界上最常见的癌症之一，已经严重威胁着人们的生命。肝癌可分为原发性与继发性两类。其中原发性肝癌是由肝脏的上皮组织或者间叶组织发展而来、危害甚大的恶性肿瘤。统计显示，有70%-90%的肝癌是肝细胞癌(HCC)。肝细胞癌作为最常见的原发性肝癌占癌症相关死亡原因的第三。尽管如此，肝癌在中国却是生存率最低的癌症。据统计，2015年中国有466100例新的肝癌病例和422100例肝癌死亡病例。如此高的患病率与死亡率迫使科学家们去寻求良策以控制与改善肝癌局势。随着科技的进步与医疗的发展，肝癌的诊断与治疗也相应取得了巨大的进步，但是还是未能找到有效治愈肝癌的途径。到目前，手术治疗依然是肝癌最有效同时也是首选的方法。不容乐观的是，如果一旦确诊，70%的肝癌患者只能接受姑息治疗。然而，超过75%的肝癌患者却不能手术切除。因此，肝癌治愈困难，目前的方案仅仅能够延长患者生存时间。此外，肝癌早期的症状无特异性，且不明显，中晚期肝癌症状较多。这使得肝癌常表现为不易被发现，且确诊的肝癌多为中晚期。因此尽早的，准确的诊断肝癌对于改善肝癌患者的结果具有重大意义。

目前，血清学肝癌标志物检查、计算机断层扫描及核磁成像、超声等是诊断肝癌的几种传统方法。其中，临床最常见肝癌标志物之一AFP的血清浓度检测是诊断肝癌常规方法之一，并且广泛应用于肝癌治疗监测和复发预测。然而，其诊断肝癌的灵敏性与肿瘤的大小相关---肿瘤直径小于3 cm的灵敏度仅为25%，而肿瘤直径大于3 cm的诊断灵敏度可达到50%。一方面，如此低的灵敏度无法提高肝癌的早期诊断。另一方面，几种肝癌标志物联合诊断能大大提高肝癌的诊断率。因此，筛选新的肝癌标志物以提高肝癌的早期诊断率迫在眉睫。

SMP30，一种衰老标志物，已被证实为钙调素（钙结合蛋白），在调节钙离子浓度及相关酶活性方面扮演重要的角色。最重要的是，相关研究已经证实SMP30是一种肝癌相关分子，SMP30的过表达可能是早期HCC保护性事件，且其将成为肝癌临床预后与治疗的潜在靶点。然而有研究表明，肝癌患者的血清中具有较高的SMP30自身抗体，而正常人血清显示阴性，并有望成为HCC血清诊断指标之一。南京中医药大学周素芳教授等前后两次都大样本分析检测抗SMP30抗体的肝癌血清阳性率，分别为39.8%, 32.4%，均表示一定的临床意义，但其阳性率都不高。在他们的研究中发现，检测人血清SMP30抗体的方法采用是传统的ELISA方法，其灵敏度和特异度都受其微量的限制，使得较多的血清样本值介于阴阳性之间。所以迫切需要一种高灵敏度、高特异度的方法用于人血清抗SMP30抗体的检测，以提高肝癌患者血清抗SMP30抗体的阳性率。

纳米技术是一个专注于纳米级材料和设备的研究和应用的领域，并广泛的应用于生物医学。纳米技术靶向诊治疾病是一种理想的方法，并正在向临床转化。纳米材料在三维空间中至少有一维处于纳米尺寸范围。已接近光的波长的尺度与较大的表面积使其表现出特有的性质。纳米材料的应用大大促进了疾病的诊断与治疗。其中，纳米金是使用最广泛的材料之一，由于它容易被许多分子如蛋白，核酸等修饰的特性。纳米金与这些具有靶向能力的分子连接后不仅能够稳定分子，而且还能够增强靶向性。抗体作为最常见的靶向试剂之一与纳米金连接形成检测探针已应用于多种物质的检测。并且纳米金有过氧化物酶性质，且比表面积大，分散性好，是一个较好的信号放大载体。因此，研究抗体偶联纳米金检测SMP30的方法与应用，是本领域技术人员亟待解决的难题。

发明内容