[发明专利]基因突变特异性扩增效率提高的DNA聚合酶

权利要求书

1.一种DNA聚合酶，所述DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示。

2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其特征是，所述DNA聚合酶区分匹配的引物和错配的引物，所述匹配的引物和错配的引物与目标序列杂交，对于所述错配的引物杂交的目标序列，其3'末端包括非典型核苷酸；所述非典型核苷酸是指除沃森克里克碱基对之外的A-C、A-G、G-U、G-T、T-C、T-U、A-A、G-G、T-T、U-U、C-C、C-U。

3.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其特征是，所述DNA聚合酶包含匹配的引物的目标序列的扩增显示的Ct值比包含错配的引物的目标序列的扩增低。

4.一种编码根据权利要求1所述的DNA聚合酶的分离的核酸序列。

5.如权利要求4所述的核酸序列，其特征在于，所述分离的核酸序列的碱基序列如SEQID NO:11或SEQ ID NO:12所示。

6.一种包括根据权利要求4或5所述的核酸序列的载体。

7.一种转化了根据权利要求6所述的载体的宿主细胞。

8.一种检测方法，包括使根据权利要求1或2所述的DNA聚合酶接触以下的：

a)一个或多个模板；

b)一个以上匹配的引物、一个以上错配的引物或一个以上匹配的引物和一个以上错配的引物两者；以及

c)核苷三磷酸；

使所述一个以上匹配的引物和错配的引物与目标序列杂交，对于和所述错配的引物杂交的目标序列，从其3'末端开始到第7个碱基位点上包括非典型核苷酸，在一个以上模板中活体外检测一个以上的基因变异或SNP；所述非典型核苷酸是指除沃森克里克碱基对之外的A-C、A-G、G-U、G-T、T-C、T-U、A-A、G-G、T-T、U-U、C-C、C-U。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征是，包括采用双链特异性染料进行熔体温度分析。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征是，通过实时PCR、标准PCR后琼脂糖凝胶中的分析、通过实时PCR的基因变异特异性扩增或等位基因-特异性扩增、四引物扩增-受阻突变体系PCR或等温扩增来完成。

11.一种包含根据权利要求1或2所述的DNA聚合酶的用于检测基因变异或SNP的组合物。

12.一种包含根据权利要求11所述的组合物的PCR试剂盒。

13.根据权利要求12所述的PCR试剂盒，其特征是，所述PCR试剂盒可用于转染PCR、微滴式数字PCR或核酸质谱分析系统。

14.根据权利要求12所述的PCR试剂盒，其特征是，所述PCR试剂盒包括一个以上的匹配引物、一个以上的错配引物或者一个以上的匹配引物和一个以上的错配引物两者，所述一个以上匹配引物和一个以上错配引物与目标序列杂交，对于和所述错配引物杂交的目标引物，从其3’末端开始到第7个碱基位点上可包括非典型核苷酸。

15.根据权利要求12所述的PCR试剂盒，其特征是，还包括核苷三磷酸。

16.根据权利要求12所述的PCR试剂盒，其特征是，还包括：

a)一个或多个缓冲剂；

b)一种结合双链DNA的定量化试剂；

c)聚合酶阻断抗体；

d)一个以上对照或对照序列；以及

e)一个或多个模板。