[发明专利]鉴定烟草sua-CMS胞质雄性不育系的分子标记

说明书

本发明公开了一种鉴定烟草sua‑CMS胞质雄性不育系的分子标记，选自orf82、orf103、orf115^a、orf100、orf115^b、orf191，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～6所示。本发明还公开了可特异性扩增该分子标记的特异性引物sp1、sp2、sp3，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7～12所示。利用本发明的分子标记可鉴定烟草sua‑CMS胞质雄性不育系(鉴定方法为：以叶片基因组DNA为模板，利用三对特异性引物之一进行扩增，检测是否扩增出特异性条带)，高效并且程序简化，结果可用于sua型烟草细胞质雄性不育系分子标记辅助育种，也为烟草专一细胞质种性鉴定提供了技术支撑和理论依据。

技术领域

本发明涉及一种鉴定烟草sua-CMS胞质雄性不育系的分子标记，及鉴定方法，属于生物技术领域。

背景技术

植物细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility，CMS)是雄蕊退化、花粉败育或功能不育等原因造成的雄蕊不能正常授粉而雌蕊功能正常的一种母性遗传性状。雄性不育系是作物杂种优势利用的前提，也是提高单产、改进品质、增强抗逆的重要途径。烟草是叶用作物，在杂交育种中使用不育系不但可以克服人工去雄授的缺点，在生产上使用不育系还能够控制种子的私自繁殖，保证烟草种子质量，维持正常的烟草生产秩序，因此烟草细胞质雄性不育在烟草育种和生产上具有很重要的地位。近年来，烟草不育系及杂交种的种植面积占我国烤烟面积的50％以上，均为sua-CMS类型，sua-CMS也是唯一一个对烟草综合性状无不利影响的不育类型(佟道儒、马文广等)。

一般不育类型通过形态学、细胞学以及分子特征等方面进行鉴定，特异分子的鉴定具有稳定性、准确性和快速性等优点，可以广泛应用于不育类型鉴定。目前尚未见到有关鉴定烟草sua-CMS胞质雄性不育系的分子标记的报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种鉴定烟草sua-CMS胞质雄性不育系的分子标记，及鉴定方法，能够快速鉴定烟草sua-CMS，大幅减少了鉴定工作量，节省了时间和资金，提高了工作效益。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种鉴定烟草sua-CMS胞质雄性不育系的分子标记，所述分子标记选自orf82、orf103、orf115^a、orf100、orf115^b、orf191，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、2、3、4、5、6所示。

本发明通过对线粒体基因大量扩增和筛选，利用ORF-Finder(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html)，BLASTN，BLASTX(Altschul等，1990)和tRNAscan-SE(Lowe和Eddy 1997)在不育系和可育对照的线粒体基因组中筛选ORF70的ORFs，在不育系和可育系中分别发现了393和417个ORF。通过BLAST比对，其中的362个ORF为不育系和可育对照共有，将sua-CMS不育系特有的31个ORF设计特异引物，在7种烟草胞质不育类型中进行扩增，发现位于122845-123313、372705-343743、414430-415454三个区段内的orf82、orf103、orf115^a、orf100、orf115^b、orf191共6个ORF(核苷酸序列依次如SEQ IDNO.1～6所示)是sua-CMS不育系特有的(如图2所示)(这6个ORFs位于三个区段内，orf82位于区段一内，orf103、orf115^a位于区段二内，orf91、orf115^b、orf100位于区段三内)。

三对特异性引物，可特异性扩增上述鉴定烟草sua-CMS胞质雄性不育系的分子标记(引物sp1、sp2、sp3分别对应上述的三个区段122845-123313、372705-343743、414430-415454)，其核苷酸序列分别如下所示(序列方向为5′-3′)：