[发明专利]一种低成本无酶免标快速检测有机磷农药的新方法

说明书

本发明公开了一种低成本无酶免标快速检测有机磷农药的新方法，主要是基于富含鸟嘌呤碱基序列的DNA[G₃T]₅与镧系金属Tb³⁺形成的复合材料，由于发生能量转移效应，[G₃T]₅能量转移给Tb³⁺，使Tb³⁺产生荧光，再加入一定量的银纳米粒子(AgNPs)溶液后Tb³⁺荧光显著增强，加入有机磷农药可引起Tb³⁺荧光的降低，其荧光降低与加入有机磷农药的浓度呈线性相关。本发明提供的方法非常简单、造价低、稳定性好、检测速度快，可进一步研制相应的试剂盒和试纸条，以满足现场快速、准确的检测要求。

技术领域

本发明涉及化学分析领域，具体涉及一种低成本无酶免标快速检测有机磷农药的新方法，本发明属于检测技术领域。

背景技术

有机磷农药(OPs)因具有品种多、药效高等特点，已逐渐成为我国应用最广、使用量最大的一类杀虫剂，是农作物病虫害防治的主要措施。其发挥作用的主要机理是在体内与胆碱酯酶形成磷酰化胆碱酯酶，胆碱酯酶活性受抑制，从而不再分解乙酰胆碱，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积，胆碱使得神经过度兴奋，引起毒蕈碱样、烟碱样和中枢神经系统症状。由于农药具有毒性高、持久性长的特点，不仅对环境造成极大的污染，农产品中农药残留过多也严重威胁着国民身体健康。

目前对于有机磷农药检测方法主要有气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法以及酶抑制法、电化学法等(Journal of separation science 2016，39，2164-2171.；Food Chemistry，2010，122，327-332.；Food Chemistry，2012，131，1569-1576.；Analytical Chemistry，2014，86，11727-11733.；Biosensors andBioelectronics，2015，68，168-174.；ACS applied materialsinterfaces，2016，8，58-8067)，这些方法均存在一定不足。色谱类分析方法需要大型分析仪器，过程操作繁琐，不能实现现场检测。酶抑制法被应用于构建电化学传感器、荧光传感器及比色传感器用于对农药的检测，其主要是基于有机磷对乙酰胆碱酶的抑制作用，而酶不仅价格高，且容易变性不易保存，酶的使用不仅增加检测成本，对检测结果的准确度也有一定的影响。这类检测方法已无法满足大批量农产品快速检测和国内外有关食品的现场快速检测需要。因此，亟需开发简单、无酶、灵敏度高、且成本低的快速检测有机磷农药的方法。

发明内容

对目标物有机磷农药实现高灵敏、高精准、简单的快速检测方法是分析化学的一个重要发展方向。针对以上存在的问题，我们开发了一种无酶、免标、成本低的快速检测有机磷农药的新方法。其操作过程简单、成本低，且检测结果具有良好的重现性，确保了检测结果的准确度。为达到上述目的，本发明创造的技术方案如下：

本发明提供了一种低成本无酶快速检测有机磷农药的新方法。将Tb³⁺和[G₃T]₅两种溶液混合(物质的量的浓度比为1:50)，然后向混合溶液中加入一定量的银纳米颗粒(AgNPs)，三者共同在室温下孵育10min，有机磷农药检测的传感体系([G₃T]₅/Tb³⁺/AgNPs)即构建完成，此种情况下Tb³⁺产生很强的荧光。在加入甲基对硫磷后，Tb³⁺荧光强度显著降低，其荧光降低与甲基对硫磷浓度呈线性相关，通过检测Tb³⁺荧光强度即可实现对甲基对硫磷的快速检测。该方法避免了乙酰胆碱酯酶的使用，不仅降低了检测成本，还简化了实验操作，提高了检测结果的准确性、可靠性。

本发明具体包括以下步骤：