[发明专利]一种体态类生物检材中游离DNA的提取方法

权利要求书

1.一种体态类生物检材中游离DNA的提取方法，包括生物检材前处理、核酸吸附和洗涤步骤，其特征在于：所述生物检材前处理为首先用去离子水洗涤生物样本，再加入螯合树脂50~200μl 的悬浮液和0.2-4 mg/ml的蛋白酶K，56℃孵育0.5-1.5 h，100℃孵育8 min，然后通过离心去除杂质，获得DNA模板；所述螯合树脂悬浮液的溶剂为水，溶质是30-80mg/ml的聚苯乙烯二乙烯基苯树脂。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述核酸吸附为生物检材前处理获得的DNA模板与吸附液以及磁珠悬浮液混合，DNA将与磁珠结合，形成了含有磁性纳米微球-DNA的复合体的溶液体系，在磁力的作用下收集所述溶液体系中的磁性纳米微球-DNA 的复合体；所述吸附液包含终浓度为60-100mM的Tris-HCl，3-6M的异硫氰酸胍盐，10-100mM的EDTA，体积百分含量为15-30％的乙醇；所述磁珠悬浮液由直径50-1200nm的纳米级硅包被磁性微球和水组成。

3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述吸附液的pH = 6.0-7.5，溶剂是水，溶质是如下终浓度的物质：60-100mM的Tris-HCl，3-6M的异硫氰酸胍盐，10-100mM 的EDTA，体积百分含量为15-30％的乙醇。

4.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述磁珠悬浮液中每ml磁珠悬浮液的组分如下：直径为50-1200nm 的纳米级硅包被磁性微球40-80 mg，其余为水。

5.如权利要求4所述的提取方法，其特征在于：所述磁珠悬浮液中每ml磁珠悬浮液中的纳米级硅包被磁性微球是50 mg。

6.如权利要求1-5任一项所述的提取方法，其特征在于：所述核酸吸附中，先将DNA模板与吸附液混合，再加入磁珠悬浮液混合，加入磁珠悬浮液混合的条件是室温翻转混合10-15min 。

7.如权利要求6所述的提取方法，其特征在于：所述磁珠悬浮液与DNA模板、吸附液的体积比是10-30∶10-300∶100-900。

8.如权利要求1-5任一项所述的提取方法，其特征在于：所述洗涤为将得到的磁性纳米微球-DNA的复合体依次用80-90%的乙醇水溶液、无水乙醇洗涤，然后用去离子水溶出DNA，得到纯化的DNA。

9.如权利要求8所述的提取方法，其特征在于：还包括洗脱步骤，所述洗脱为洗涤后用枪头吸干残留液体，65℃温浴6-10 min ，然后往离心管中加入去离子水，震荡后65℃温浴5-8 min，磁分离，吸取DNA，4℃保存。