[发明专利]SKH-1小鼠皮肤鳞癌细胞系及其在移植性瘤模型制备中应用

说明书

本发明公开了SKH‑1小鼠皮肤鳞癌细胞系及其在移植性瘤模型制备中应用，命名为XL50，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号是CCTCC No：C201827。本发明内容包括UV诱导小鼠构建SCC模型；原代培养小鼠皮肤鳞癌细胞XL50；小鼠皮肤鳞癌细胞XL50成瘤性试验；构建SKH‑1小鼠移植性皮肤鳞癌模型。本发明的细胞生长良好并能连续传代，稳定增殖，其培养条件、传代及冻存方法均为常规细胞培养技术，便于操作。细胞的细胞增殖较快，细胞恶性度较高。制备出的细胞株能很好的应用于构建具有免疫原性的移植性瘤模型，既弥补了原有的小鼠SCC模型建模周期过长和肿瘤的大小的局限性，又弥补了裸鼠移植性肿瘤免疫功能缺乏的不足，为今后SCC相关免疫机制的研究提供了一个很好的模型。

技术领域

本发明涉及一种SKH-1小鼠皮肤鳞癌细胞系及其在移植性瘤模型中应用。

背景技术

皮肤鳞状细胞癌(Squamous Cell Carcinoma，SCC)作为人类常见的皮肤恶性肿瘤之一，约占非黑素性皮肤肿瘤的20％。SCC的发生与紫外线(Ultraviolet，UV)密切相关，并且近年来随着全球环境破坏导致臭氧层受损加重，SCC的发病率也逐年上升。由于SCC发展较快并可发生转移，预后较差，已成为威胁人类健康的主要皮肤肿瘤，越来越受到人们的重视。SCC主要与过度UV暴露导致的DNA损伤相关，但其具体发生、发展机制尚未完全阐明。传统的治疗方法，包括手术、激光、冷冻和放疗等，虽然可以直接去除或破坏肿瘤组织，但仍存在较高复发率，如何有效防治SCC并降低其复发率是当前亟需解决的临床难题。

人类肿瘤的发生、发展机制和防治等相关的基础研究，均需要与人肿瘤发生相似的动物模型和细胞系。体外分离和培养肿瘤细胞并建立相关肿瘤细胞系，是研究肿瘤的重要资源和手段，有利于促进肿瘤相关的分子细胞学机制和治疗药物疗效的研究。体外培养肿瘤细胞应用研究具有许多优点：1)可免受机体内环境影响避免个体差异对实验结果造成的影响，有利于分析各种外界因素对肿瘤细胞的作用；2)一方面可从细胞水平观察、研究肿瘤细胞的结构及功能，另一方面也能在基因及分子水平分析癌变机理；3)有利于快速耐药机理的研究，便于筛选抗癌药物；4)可缩短研究周期，更加经济。因此，建立与人SCC发生相似的肿瘤细胞系和构建合适的动物模型是研究SCC癌变机理和防治的重要方法。

目前，UV诱导和二甲基苯蒽(7,2-dimethyl-1,2-benz[a]anthracene,DMBA)化学诱导的小鼠SCC模型是国际上公认的经典小鼠SCC动物模型，已广泛用于SCC发生、发展机制的相关研究。

现有技术有采用SKH-1无毛小鼠，通过日光紫外线模拟器照射成功构建了UV诱发的小鼠SCC模型。但该造模方法存在建模时间长，UV所致肿瘤大小不一，肿瘤数量无法控制等问题，因此构建一个成瘤周期短，可有效控制瘤体体积和数量的的移植性SCC模型非常必要。

有关皮肤SCC细胞系建立的研究可追溯到1975年。1975年Moore成功分离并建立了人SCC细胞株COLO16，随后逐渐建立了HSC-I和HSC-Ib，HSC-5，SCL-1，SCC-1CB等人SCC细胞系，这些细胞系的建立大大促进了SCC相关分子机制研究领域的发展。目前运用最多的鳞癌细胞系为SCL-1细胞。与口腔、食道、膀胱和肺鳞状细胞癌细胞系的建立相比，有关人皮肤鳞状细胞癌细胞系建立的报道较少，而且很少有与人皮肤鳞状细胞系相匹配的直接从小鼠SCC动物模型的SCC组织中分离而建立的细胞系。2010年Hsieh等报道了从DMBA/TPA二阶段法诱导的骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)缺乏小鼠SCC组织中成功分离OPN缺陷小鼠皮肤鳞细胞系，并通过皮下接种成功构建了具有健全免疫力的小鼠SCC种植瘤模型。

OPN是一种磷酸化糖蛋白，最早因其从骨基质中分离而得名。OPN与恶性肿瘤细胞的增殖，侵袭及转移等多种病理过程相关。来源于OPN缺陷的SCC组织的细胞系和移植性模型，具有一定的局限性，限制了其在SCC生物学特性和癌变机理的研究中的应用。因此，建立与人SCC发生相似的小鼠SCC细胞系和构建具有健全免疫力的小鼠SCC移植性模型是非常必要的。

发明内容