[发明专利]一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒及其使用方法在审
| 申请号： | 201810694904.7 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN109030829A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 曹丹 | 申请（专利权）人： | 南京航思生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/53;G01N21/76 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210000 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 化学发光法检测 定量试剂盒 氧化石墨烯 化学发光 偶联物 淬灭 抗体 化学发光免疫分析 化学发光信号 免疫反应诱发 限制性内切酶 单个样品 分离纯化 分子信标 互补配对 碱基互补 酶切位点 免疫分析 末端标记 石墨烯 试剂盒 吖啶酯 触击 碱基 邻位 吸附 洗涤 堆积 释放 检测 分析 | ||
1.一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用的检测溶液包含DNA1- IL-6抗体1 偶联物、DNA2- IL-6抗体2 偶联物、标记吖啶酯的DNA3、限制性内切酶和氧化石墨烯，所述DNA1与DNA2有6个碱基互补，所述DNA3含2个酶切位点，且分别有9个碱基和DNA1、DNA2互补配对，DNA3通过π-π堆积作用吸附在氧化石墨烯表面，其末端标记的AE的化学发光因发生CRET而被淬灭。
2.根据权利要求1所述的一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒，其特征在于：所述DNA1 含有53个碱基，3’端修饰巯基，通过偶联剂琥珀酰亚胺-4-环已烷-1-碳酸酯，与IL-6抗体1上的氨基共价结合，形成DNA1-IL-6抗体1偶联物。
3.根据权利要求1所述的一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒，其特征在于：所述DNA2 含有51个碱基，5’端修饰巯基，通过偶联剂SMCC与IL-6抗体2上的氨基共价结合，形成DNA2- IL-6抗体2偶联物。
4.根据权利要求1所述的一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒，其特征在于：所述DNA3含有22个碱基，5’端修饰吖啶酯（AE），从5’端开始的3-9 及12-18 碱基位点的碱基序列都为CCTCAGC，可被限制性内切酶Nt.BbvCI 识别，从而剪切其形成的双链；
DNA3从5’端开始的1-9与DNA2从3’端开始的1-9碱基位点的碱基完全互补；
DNA3从3’端开始的5-13与DNA1从5’端开始的1-9碱基位点的碱基完全互补。
5.如权利要求1-4中任一项所述的一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒的使用方法，其特征在于：所述使用方法包括以下步骤：
（1）将样品溶液和检测溶液混合，并在37℃条件下温育5-10 分钟；
（2）加入化学发光底物，通过化学发光检测仪进行光信号采集；
（3）从标准曲线求出样品中IL-6的浓度。
6.根据权利要求5所述的一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒的使用方法，其特征在于：所述发光底物为过氧化氢和氢氧化钠。
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