[发明专利]一种茶叶中游离氨基酸对映异构体的检测方法

说明书

本发明属于茶叶分析检测技术领域，具体涉及一种茶叶中游离氨基酸对映异构体的检测方法。其包括以下步骤：a)氨基酸混合消旋体标准品溶液的配制；b)氨基酸混合消旋体标准品的衍生化反应；c)氨基酸对映异构体定性参数的确定及定量标准工作曲线的绘制；d)茶叶中游离氨基酸对映异构体的定性定量分析。本发明方法在极广的浓度范围内（12.5‑2500 nmol）呈现较好的线性关系，相关系数高达0.9987，检测限低至2.5 nmol，相对标准偏差值介于3.26‑11.48%，可实现对茶叶中15对常见游离氨基酸对映异构体的同时精确定性定量检测。

技术领域

本发明属于茶叶检测分析技术领域，具体涉及一种茶叶中游离氨基酸对映异构体的检测方法。

背景技术

氨基酸是茶叶中的主要化学成分之一，与茶叶的滋味及香气形成均有密切的关系。目前在茶叶中发现并鉴定的氨基酸约有26种，其中茶氨酸是茶汤鲜味的主要呈味因子；谷氨酸和天冬氨酸是茶叶中重要且含量高的一类氨基酸，是构成茶叶鲜爽滋味的重要成分；苯丙氨酸、色氨酸、精氨酸等则呈现甜味的口感，对茶汤滋味有益。

天然氨基酸除甘氨酸外都具有手性中心，存在L和D两种构型，它们的生理活性及呈味特性往往截然不同。L型氨基酸被称作天然氨基酸，普遍存在于生命体中，早期的研究甚至认为自然界存在的氨基酸均为L型。而D型氨基酸则在20世纪70年代被科学家在人体中发现，到80年代后期才被广泛研究，虽然不是构成蛋白质的基本结构单元，但在许多植物、微生物和高等动植物中均发现了它们的存在。研究发现，部分的D构型氨基酸有着十分理想而特别的滋味，而其相应的L构型氨基酸却有着令人不悦的滋味。其中D-色氨酸、D-苯丙氨酸、D-组氨酸、D-酪氨酸及D-亮氨酸分别呈现出高于蔗糖35、7、7、6及4倍的甜味。由此可知，如果茶叶中存在D构型氨基酸，那它们对茶汤滋味的影响应该与相应的L构型有较大差异，因此开发一种茶叶中游离氨基酸对映异构体的检测方法不仅在理论基础上有着重要的意义，而且在茶汤滋味的调控上也有着潜在的应用价值。

多年来，研究者们对茶叶中游离氨基酸的组成及其与茶叶品质的关系进行了详细而深入的研究，已经取得了不错的进展。然而，由于分析手段上的限制，尽管氨基酸的检测方法已经十分成熟，但往往仅停留在平面结构层面，茶叶中游离氨基酸对映异构体的检测方法除茶氨酸对映异构体外尚未有报道。研究表明绿茶、乌龙茶及部分红茶中均存在较高含量的D-茶氨酸，D-茶氨酸的比例与大吉岭红茶的等级存在一定的相关性，且白茶萎调、储藏过程以及碱化处理可促进D-茶氨酸的生成。以上的研究有力地证明了D-氨基酸对茶叶风味品质具有较为显著的影响，然而目前尚无针对茶叶中其它重要游离氨基酸对映异构体的检测方法，因此也无法查明其他游离氨基酸对映异构体对茶叶滋味形成的具体影响，严重制约了人们对茶叶滋味成分的科学认知。

另一方面，在检测手段上，茶叶中茶氨酸对映异构体多数采用高效液相色谱法进行分离，然而，高效液相色谱法需要耗费大量的洗脱剂，将对环境造成较大负担，且由于氨基酸在反相流动相体系中的洗脱速度十分快，小分子量的氨基酸往往在5分钟内已洗脱完毕，这不仅导致氨基酸对映异构体分离效果不佳，更会导致不同化学结构氨基酸色谱峰严重重叠的现象。因此，采用该方法分离茶汤复杂化学体系中的多种游离氨基酸具有较大的难度，针对茶氨酸对映异构体的检测方法并不适用于其他游离氨基酸对映异构体的检测分析。气相色谱-质谱分析具有柱效高、分析速度快、易于定量且具有可供参考的标准谱图库等优点，在氨基酸常规检测中也有一定应用，针对氨基酸对映异构体，可采用衍生化法将样品中的氨基酸衍生成易汽化的衍生物后，进入气相色谱系统与手性固定相作用从而将对映异构体分离。由于氨基酸的分子量及沸点各异，而化合物在GC-MS的出峰时间与沸点呈正比关系，因此各氨基酸在GC-MS上的分离度较好，较少出现峰重叠现象。目前，该方法尚未被应用于茶叶中多种游离氨基酸的对映异构体检测中。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明旨在提供一种茶叶中游离氨基酸对映异构体的检测方法，前处理简单，容易操作，定量精确，重复性好，能够实现对茶叶中多种游离氨基酸对映异构体的同时检测。

本发明采用的技术方案如下：