[发明专利]抗CD19单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种抗CD19单克隆抗体，其V_H链的互补决定区CDR具有选自下组的CDR的氨基酸序列：SEQ ID NO：3所示的重链CDR1，SEQ ID NO：4所示的重链CDR2，SEQ ID NO：5所示的重链CDR3；其V_L链的互补决定区CDR具有选自下组的CDR的氨基酸序列：SEQ ID NO：6所示的轻链CDR1，SEQ ID NO：7所示的轻链CDR2，SEQ ID NO：8所示的轻链CDR3。本发明还提供了所述单克隆抗体的制备方法及其应用。该单克隆抗体可特异性识别细胞表面的人CD19蛋白；以1×10‑7M或更低的KD与人CD19结合；具有免疫原性低，不引起HAMA反应等优点。

技术领域

本发明涉及生物免疫技术领域，尤其涉及抗CD19单克隆抗体及其制备方法与应用。

背景技术

CD19是B细胞表面的跨膜蛋白。它与B细胞活化、信号传导及生长调节密切相关,是B淋巴细胞表面的一种功能受体分子,在B细胞抗原受体(BCR)识别抗原时构成B细胞双重抗原结合模型,参与B细胞内Ca²⁺的转运,调节B细胞的活化与增殖。CD19作为重要标记物被广泛应用于白血病、淋巴瘤及免疫系统疾病的诊断和预后判断.同时利用CD19作为免疫治疗的一个重要靶点,CD19是重要的B细胞恶性肿瘤的靶点。CD19几乎表达在B细胞发育的所有时期，以及各种B细胞肿瘤中，但是，重要的是CD19并不表达在多能性造血干细胞上。这些特点使得CD19成为了很好的B细胞肿瘤的靶点。新型抗体药物在治疗白血病和淋巴瘤方面,研发出包括非结合抗体、药物共轭抗体、双特异性抗体及嵌合抗原受体。

已经显示CD19结合既增强也抑制B细胞激活和增殖，这取决于发生的交联的量(Tedder，同上)。CD19在90％以上的B细胞淋巴瘤上表达，并且预测其在体外和体内影响淋巴瘤的生长(Ghetie，同上)。已经产生的抗CD19抗体为鼠抗体。使用鼠抗体治疗人类受试者的一个缺点是给病人施用后发生人抗小鼠(HAMA)应答。人体对鼠源抗体具有免疫反应，这也是鼠源抗体应用于临床治疗的主要障碍。通过基因工程抗体技术可以在基因水平改造抗体，降低鼠源抗体的免疫原性，提高抗体特异性、稳定性和亲和力。对鼠源抗体进行人源化改造，可保留抗体可变区与人源抗体恒定区融合，提高抗体亲和力；或改造抗体结构，构建只保留抗体可变区的scFv或含抗体可变区和部分恒定区的Fab，可提高抗体在体内的吸收百分比和半衰期。单链抗体(single—chain antibody fragment，scFv)是单克隆抗体的一种形式，通过将抗体的可变区通过铰链区相连接，形成了单链可变区，也称为单链抗体。scFv保留了抗体的抗原结合能力的最小单位。由于其结构更小，更利于基因工程操作，所以被广泛用于人源抗体的构建、筛选和应用。例如CAR-T技术就采用scFv结构的抗体做为嵌合受体识别抗原的区域。因此，需要更有效地治疗和/或预防CD19介导的疾病的改善的治疗性抗CD19抗体。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种抗CD19单克隆抗体及其制备方法与应用，可以特异性识别细胞表面的人CD19蛋白，对CD19阳性的Hela细胞、K562细胞具有显著的杀伤效应；该抗体以1×10-7M或更低的KD与人CD19结合；与Raji和DaudiB细胞肿瘤细胞结合；具有免疫原性低，不引起HAMA反应等优点，具有更好的稳定性和安全性。

本发明是这样实现的：

在本发明的第一方面，提供了一种抗CD19单克隆抗体V_H链，它的互补决定区CDR具有选自下组的CDR的氨基酸序列：

SEQ ID NO：3所示的重链CDR1，SEQ ID NO：4所示的重链CDR2，SEQ ID NO：5所示的重链CDR3。

更优选地，所述重链可变区包含与选自SEQIDNO：1的氨基酸序列至少80％同源的氨基酸序列；