[发明专利]一种基于金属离子标记的电化学检测方法

说明书

本发明公开了一种基于金属离子标记的电化学检测方法，采用的技术方案包括三种同类方法，以方法一为基础方法，该方法包括以下过程：(1)金属离子材料标记待测物的一株抗体；(2)具有特异亲和性一对物质中的一个标记待测物的另一株抗体；(3)具有特异亲和性一对物质中的另一个标记纳米微球；(4)电化学检测过程。本发明利用金属离子的电化学特性以及电化学法对金属离子检测的高度灵敏性，采用金属离子标记免疫复合物并通过纳米微球收集免疫复合物，然后通过分离将带有免疫复合物的纳米微球富集于电极表面，大大提高了检测灵敏度，该方法稳定性高、重复性好、结果准确可靠，实现了快速、灵敏检测的目的，拓展了基于金属离子标记的电化学检测方法在体外诊断领域中的应用。

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其是涉及一种基于金属离子标记的电化学检测方法。

背景技术

电化学检测技术是近年来新兴的灵敏分析检测技术，是一种以不同方式的电信号作为激发与检测信号的分析检测技术。电化学检测技术由于其操作简单、灵敏度高和检测速度快等优势而备受青睐，已经在生命科学、生物科学、临床分析、环境监测以及表面科学等领域得到了广泛的研究与应用。

电化学传感器可实现经济、高效、实用、快速、灵敏、精确的检测与分析，是一种将电化学分析与传感技术结合所产生的一种传感器件，其检测原理是基于被测物质影响电极体系的电化学信号，从而实现对被测物质的定量分析。

目前的研究中金属离子作为标记物进行免疫检测通常采用质谱免疫分析法，采用电化学方法非常少。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种提高检测灵敏度，方法稳定性高、重复性好、结果快速准确可靠的基于金属离子标记的电化学检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：包括三种同类方法，

方法一、一种基于金属离子标记的电化学检测方法，包括以下过程：

(1)金属离子材料标记待测物的一株抗体；

(2)具有特异亲和性一对物质中的一个标记待测物的另一株抗体；

(3)具有特异亲和性一对物质中的另一个标记纳米微球；

(4)检测过程

①将含有待测物的样本、金属离子材料标记的待测物的一株抗体和具有特异亲和性的一对物质中的一个标记待测物的另一株抗体加入到反应池中，经过3～90min的温育反应，形成一端标记有金属离子材料另一端标记有具有特异性亲和性的一对物质中的一个的免疫复合物；

②然后向步骤①反应后的混合物中加入表面标记有具有特异亲和性的一对物质中的另一个的纳米微球，步骤①中免疫复合物一端的具有特异亲和性的一对物质中的一个与标记在纳米微球表面的具有特异性亲和性一对物质中的另一个进行特异性结合，形成表面结合了步骤①中的免疫复合物的纳米微球；

③采用分离的方式将步骤②中表面结合了步骤①中的免疫复合物的纳米微球固定到工作电极表面，然后移除反应池中的剩余液体，加注电解液；

④采用三电极体系或二电极体系进行测定，将电极正确的连接在电化学工作站上，利用电化学检测方法测定纳米微球表面的免疫复合物上金属离子的伏安曲线图，然后在测得的伏安曲线图中金属离子理论特征峰的±100mV范围内寻找实际特征峰，计算半峰面积，用半峰面积与待测物浓度之间用Log-Log回归方程进行拟合制备标准曲线，通过标准曲线计算待测物的含量。

方法二、一种基于金属离子标记的电化学检测方法，包括以下过程：

(1)金属离子材料标记待测物的一株抗体；

(2)具有特异亲和性一对物质中的一个标记待测物的完全抗原；

(3)具有特异亲和性一对物质中的另一个标记纳米微球；