[发明专利]一种由猪白蛋白与猪干扰素γ组成的融合蛋白及其制备方法和一种重组猪长效干扰素γ

权利要求书

1.一种由猪白蛋白与猪干扰素γ组成的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示，记为融合蛋白1；或如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示，记为融合蛋白2。

2.一种编码如权利要求1所述的融合蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示，记为基因组1；或如SEQUENCE LISTING 400〈4〉所示，记为基因组2。

3.含有如权利要求2所述基因的表达载体。

4.含有如权利要求2所述基因的基因工程菌。

5.一种重组猪长效干扰素γ，其特征在于，所述重组猪长效干扰素γ由权利要求1所述的融合蛋白与冻干保护剂混配之后，经冷冻干燥而成。

6.根据权利要求1所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：将权利要求3所述的表达载体导入到大肠杆菌宿主细胞中，获得基因工程菌，基因工程菌经IPTG诱导表达后得到所述融合蛋白的粗品，经纯化后即可得到融合蛋白。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述基因工程菌为pET-32a/rAlb-IFNγ，其制备方法为：

(1)设计引物，通过反转录得到或者人工合成连接有柔性linker序列的猪白蛋白和猪干扰素γ的目的基因；通过柔性linker将猪白蛋白和猪干扰素γ的目的基因连接起来，目的基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示或如SEQUENCE LISTING 400〈4〉所示；

(2)将连接后的目的基因连接到pET-32a质粒上获得表达载体；

(3)将表达载体导入到大肠杆菌宿主细胞中，即可得到基因工程菌pET-32a/rAlb-IFNγ。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌宿主细胞为BL21(DE3)感受态细胞或带有pGro7质粒的BL21(DE3)感受态细胞。

9.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述纯化的方法为：融合蛋白的粗品先后经亲和层析、阴离子交换层析和分子筛层析纯化。

10.根据权利要求5所述的重组猪长效干扰素γ的应用，其特征在于，所述重组猪长效干扰素γ的半衰期长达73小时以上，具有广谱抗病毒作用并能提高猪自身的免疫应答。