[发明专利]一种叶片石蜡切片方法

说明书

本发明公开了一种叶片石蜡切片方法，操作程序：取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡与包埋、修块与粘接、切片、粘片、脱蜡、染色、脱水透明、封片。叶片石蜡切片过程中，对脱水程序、透明程序、透蜡方法、染色方法及封片进行了改进，即进行了脱水程序的确定、透明程序的确定、透蜡程序的确定、染色及封片方法的改进。该方法同样适用于其它不同厚度及性质的叶片。该方法在实际上可以解决厚度性质不一的叶片石蜡切片制作，在石蜡制作理论上试行推广一种统一的行之有效的制作方法。

技术领域

本发明属于石蜡切片技术领域，涉及一种植物石蜡切片方法，特别涉及一种叶片石蜡切片方法。

背景技术

石蜡切片广泛用于组织学常规制片技术中，主要用于观察细胞组织的形态结构，并可长期保存。石蜡切片制作程序及环节繁多，周期长，每个环节都会影响切片质量，例如切片制作过程中容易出现切片弯曲、切片裂纹等问题，这些问题虽然可以克服，但是如果出现材料破碎，却是无法补救，必须重新制作切片。材料破碎的原因追溯到石蜡制作过程的许多步骤，包括脱水、透明、透蜡、包埋、切片、脱蜡及封片等等，只要其中一个步骤出错，都可能导致材料破碎。其中脱水、透明、透蜡、包埋、脱蜡等步骤涉及试剂浓度、成分比例、浸泡时间等因素，切片、染色及封片等过程涉及实际的技术问题。厚革质叶片由于叶片特别厚，制作过程就会带来相当大的困难。首先，试剂进入组织比较困难，但又不能以单纯延长试剂浸泡时间来达到目的，因为浸泡时间过长，会给材料带来不利的影响，比如二甲苯浸泡时间过长，会造成材料脆性增大，组织易碎。其次，脱水过程也比较不容易，而脱水不彻底也会形成空洞蜡片，所以厚革质叶片石蜡切片制作常会出现材料破碎，导致切片制作失败。

发明内容

本发明的目的在于针对现有的石蜡切片制作方法中存在的上述问题，提供一种叶片石蜡切片方法。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种叶片石蜡切片方法，具体包括以下步骤：

1)取材，叶片取过中脉处，长5-8mm，宽2-5mm，且主脉两侧的叶片相等；

2)将所得叶片用固定液固定，用与固定液中同浓度的酒精连续浸洗两次；

3)以70％乙醇开始逐级增加乙醇浓度，对洗涤后的叶片进行脱水；

4)用相同体积的二甲苯和纯酒精混合对脱水后的叶片处理2～3h后，用纯二甲苯处理两次，每次1-2h；

5)浸蜡与包埋，透蜡按二甲苯和石蜡体积比为1:1溶液于恒温箱中过渡浸蜡，之后换成纯石蜡于恒温箱中浸蜡，期间换3次纯石蜡，透蜡后用纸盒包埋；

6)用单面刀片将大蜡块切成合适小块，组织四周留有1-2mm宽的石蜡，将切片用滤纸吸去多余水分并烘干；

7)将粘有蜡片的载玻片脱蜡，将脱蜡的切片放于番红水溶液中染色；

8)用95％酒精和两次纯酒精脱水，每次时间0.5-1min，纯酒精和二甲苯各一半的混合液2min后，纯二甲苯5min；

9)封片。

进一步，所述的固定液的用量为材料体积的20～30倍。

进一步，所述的脱水具体为：以70％乙醇1h，85％乙醇1h，95％乙醇1h，100％乙醇30min，100％乙醇30min。

进一步，所述的切片采用手摇轮转式切片机切片，切片的厚度为8-14μm。

进一步，所述的脱蜡的具体过程为：纯二甲苯10min；1/2二甲苯和1/2纯酒精2min；100％、95％、85％、70％、50％、30％酒精和蒸馏水各5～10min。