[发明专利]一种全基因组杂交克隆方法在审
| 申请号： | 201810703354.0 | 申请日： | 2018-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN108949743A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 翁炳焕 | 申请（专利权）人： | 翁炳焕 |
| 主分类号： | C12N15/06 | 分类号： | C12N15/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 317300 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 克隆 全基因组 传统基因 杂交细胞 细胞 感受态细胞 亲代细胞 杂交克隆 繁殖 基因组 胰蛋白酶 短片段DNA 基因载体 生物领域 遗传物质 混合液 染色体 胞核 胞浆 胞膜 替换 杂交 筛选 消化 融合 继承 | ||
【权利要求书】：
1.一种全基因组杂交克隆方法，其特征在于，以能在体外无限繁殖的鼠sp2/0细胞替换传统基因克隆的基因载体和感受态细胞，通过细胞融合将待克隆基因导入sp2/0细胞，使之与sp2/0细胞的DNA和/或RNA杂交并随sp2/0细胞的无限繁殖而克隆，解决了只能克隆短片段DNA而不能同步克隆细胞内全基因组的传统基因克隆技术所不能解决的问题。
2.根据权利要求1所述的一种全基因组杂交克隆方法，其特征在于，所述细胞融合将含待克隆基因的细胞和sp2/0细胞在融合前以0.25％胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化30分钟。
3.根据权利要求1所述的一种全基因组杂交克隆方法，其特征在于，所述细胞融合采用PEG作用或电融合的常规细胞融合。
4.根据权利要求1所述的一种全基因组杂交克隆方法，其特征在于，所述细胞融合采用IgG作为促融合剂，使具有IgG Fc受体的待基因克隆细胞与具有IgG Fab受体的sp2/0细胞被IgG连接为免疫复合物，进而进行常规细胞融合。
5.根据权利要求1所述的一种全基因组杂交克隆方法，其特征在于，所述细胞融合采用IgG和SPA作为促融合剂，使均具有IgG Fab受体的待基因克隆细胞和sp2/0细胞均被IgGFab结合，再被具有IgG Fc受体的SPA连接为免疫复合物，进而进行常规细胞融合。
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