[发明专利]环介导等温扩增检测甲型H3N2流感病毒的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种环介导等温扩增检测甲型H3N2流感病毒的试剂盒，所述试剂盒包括引物组。所述引物组由SEQ ID NO:1所示的上游外部引物F3、SEQ ID NO:2所示的下游外部引物B3、SEQ ID NO:3所示的上游内部引物FIP和SEQ ID NO:4所示的下游内部引物BIP组成。本发明的试剂盒具有特异性强、灵敏度高等特点，检测H3N2流感病毒方便快捷、价格低廉，适用于基层医疗单位推广使用。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种环介导等温扩增检测甲型H3N2流感病毒的试剂盒及方法。

背景技术

流行性感冒(简称流感)是流感病毒引起的急性呼吸道感染，也是一种传染性强、传播速度快的疾病。甲型流感病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，其中H1N1、H2N2、H3N2主要感染人类，其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。自从1968年首次出现以来，甲型H3N2流感病毒一直是主要的流感病毒传播亚型。

流感是一种以高热、肌痛、头痛、咽喉痛和咳嗽为特征的呼吸系统疾病，一般来说，流感具有自限性，但可能会危及包括幼儿、孕妇、老年人等免疫力低下人群的生命。流感疫苗根据流行株每年更新一次，如果在发病后24-48小时内给予抗病毒药物治疗，可有效对抗流感。因此，早期准确诊断流感对于及时干预治疗以及控制疾病传播起着关键作用。流感和其他呼吸道感染的临床症状非常相似，因此通过临床表现很难区分，只有通过实验室诊断才能鉴别。流感病毒的诊断方法包括病毒分离培养、抗原/抗体检测和分子生物学方法如逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。病毒分离培养耗时较长，需要几天到几周的时间才能得到结果，在流感流行期间不适用。抗原/抗体检测操作复杂，在感染早期敏感性不高。RT-PCR有快速、灵敏和特异等优点，但需要昂贵的实验设备和经过培训的实验室人员，其很难在基层医疗单位使用。

随着分子生物学的发展，许多新的分子诊断技术也被开发出来。2000年报道了一种新的核酸扩增方法—环介导等温扩增(LAMP)，其原理是使用具有链置换活性的DNA聚合酶和一组专门设计的引物在恒温条件下快速高效地扩增靶DNA。与传统的检测方法相比，LAMP的4个引物是根据靶序列的6个不同区域设计的，具有高度特异性，一旦有引物不匹配将导致反应不会发生。另外，LAMP检测比PCR灵敏度高10-100倍，可以检测10拷贝甚至更少的模板。与传统的PCR相比，LAMP更快捷，不需要反复的升温降温过程。更重要的是，LAMP反应成本低廉，操作简单，仅需要水浴锅等简单设备就能完成反应。在反应体系中加入逆转录酶即可完成逆转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)，可用于检测RNA病毒。RT-LAMP方法目前已成功应用于检测各种RNA病毒，包括登革病毒、日本脑炎病毒、西尼罗河病毒等。RT-LAMP扩增结果可以通过使用染料直接查看，从而缩短检测时间。目前针对甲型H3N2流感病毒尚缺乏快速、准确、操作简单、成本低廉的，同时满足基层医疗单位需求的检测方法。

发明内容

本发明针对现有技术中甲型H3N2流感病毒检测速度慢、成本高以及操作复杂的技术问题，目的在于提供一种环介导等温扩增检测甲型H3N2流感病毒的试剂盒，以满足基层医疗单位的检测需求。

本发明的环介导等温扩增检测甲型H3N2流感病毒的试剂盒包括引物组，所述引物组由SEQ ID NO:1所示的上游外部引物F3、SEQ ID NO:2所示的下游外部引物B3、SEQ IDNO:3所示的上游内部引物FIP和SEQ ID NO:4所示的下游内部引物BIP组成。

具体地，上游外部引物F3:5'-CATCATGCAGTGCCAAAC-3'；

下游外部引物B3:5'-ACAAAAAGGTCCCATTCCTT-3'；

上游内部引物FIP:

5'-AACTCTGAACCAGCTCAGTAGCGGAACGCTAGTGAAAACAATC-3'；

下游内部引物BIP: