[发明专利]利用VAK技术在体外激活免疫细胞的方法

说明书

本发明公开了一种利用VAK技术在体外激活免疫细胞的方法。利用VAK技术可以在体外激活癌症病患的自体免疫细胞，将这些激活的免疫细胞回输病人体内，可以发挥很好的抗肿瘤效果，且由于是自身的免疫细胞，无排斥反应，安全可靠。

技术领域

本发明涉及一种利用VAK技术在体外激活免疫细胞的方法，属于生物技术领域。

背景技术

现有技术中针对癌症治疗已经开发了多种方法，如手术割除、放疗、化疗、抗癌药物、病毒瘤内注射等等，但是由于癌症病患自身免疫细胞功能低下或对癌细胞耐受，使得这些方法有时候效果欠佳。所以，在治疗癌症的过程中提高患者自身的免疫力，激活针对癌细胞的免疫反应是非常关键的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用VAK技术在体外激活免疫细胞的方法，能够在在杀伤癌细胞的同时，促进肿瘤相关抗原的释放，有利于诱导特异性抗肿瘤免疫反应。

为实现上述目的，本发明所提供的利用VAK技术在体外激活免疫细胞的方法，步骤如下：

(1)从患者的外周血或癌性胸腹水样本中分离免疫细胞；

(2)将灭活单纯疱疹病毒与免疫细胞共孵育，以激活免疫细胞；

(3)去除灭活单纯疱疹病毒，获得已经激活的免疫细胞。

优选地，所述步骤(3)为用磷酸盐缓冲液洗涤去除病毒，获得已经激活的免疫细胞。

可选地，所述包含免疫细胞的体液为外周血或癌性胸腹水。

可选地，所述病毒为DNA或RNA病毒，包含但不限于单纯庖疹病毒。

可选地，所述病毒为重组型单纯疱疹病毒或野生型单纯单纯疱疹病毒。

可选地，所述病毒为I型单纯疱疹病毒或II型单纯疱疹病毒。

优选地，所述病毒为重组II型单纯疱疹病毒，其保藏编号为CGMCC No.3600。

本发明采用的是VAK(Virus activated killer)技术，是发明人的创新技术，它是将经病毒激活的免疫细胞回输病人体内，从而发挥抗肿瘤作用。一些癌症病人自身免疫细胞功能低下或对癌细胞耐受，病毒可有效激活这些免疫细胞(经VAK技术激活的免疫细胞简称为VAK细胞)，使其发挥强大肿瘤杀伤作用，且VAK细胞在杀伤癌细胞的同时，促进肿瘤相关抗原的释放，有利于诱导特异性抗肿瘤免疫反应。

本发明的有益效果：利用VAK技术可以在体外激活癌症病患的自体免疫细胞，将这些激活的免疫细胞回输病人体内，可以发挥很好的抗肿瘤效果，且由于是自身的免疫细胞，无排斥反应，安全可靠。

附图说明

图1为小鼠实验方案时间轴。

图2为oHSV2单次刺激小鼠外周血中CD4+T细胞的含量；图中，(A)小鼠不植瘤仅注射制剂缓冲液组；(B)小鼠不植瘤仅注射oHSV2实验组；(C)小鼠植瘤且注射制剂缓冲液组；(D)小鼠植瘤且注射oHSV2实验组。

图3为oHSV2多次刺激小鼠外周血中CD4+T细胞的含量；图中，(A)小鼠不植瘤仅注射制剂缓冲液组；(B)小鼠不植瘤仅注射oHSV2实验组；(C)小鼠植瘤且注射制剂缓冲液组；(D)小鼠植瘤且注射oHSV2实验组。

图4为oHSV2多次刺激小鼠脾脏中CD4⁺T细胞的含量；(A)小鼠不植瘤仅注射制剂缓冲液组；(B)小鼠不植瘤仅注射oHSV2实验组；(C)小鼠植瘤且注射制剂缓冲液组；(D)小鼠植瘤且注射oHSV2实验组。

图5为不同时间点IFN-γ细胞因子表达量变化。

图6为oHSV2能够促进人源PBMC的增殖。