[发明专利]一种酿酒酵母的发酵培养基和利用该培养基制备乙醇、活性干酵母的方法

权利要求书

1.一种酿酒酵母的发酵培养基，其特征在于：其制备步骤如下：

量取蒸馏水于锥形瓶中，放到水浴锅中在60-70℃温度下预热；准确称取玉米面，加入已经提前预热的蒸馏水中并搅拌使其混合均匀，蒸馏水：玉米面的质量比为6:5-7:4；使用1mol/L的盐酸或1mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH值至5-6；向玉米浆中添加300μL/L的液化酶；将盛有玉米浆的锥形瓶放在水浴锅中，温度设置为90-99℃进行水浴，液化2-6h，液化过程中通过不断搅拌使浆液混合均匀；取出盛有玉米浆的锥形瓶使其冷却到30±1℃，用1mol/L的盐酸调节pH值为4-4.5，向其中加入300μL/L糖化酶，混合均匀后放入水浴锅中，设置温度为60-70℃，糖化8-14h；糖化结束后，将玉米浆液多次通过纱布进行过滤，以3000-5000r/min离心10-20min，收集离心后的上清液并进行1次或2次抽滤；在99℃水浴中灭菌20-30min，同时添加质量终浓度为0.05％的(NH₄)₂HPO₄和质量终浓度为0.05％的KH₂PO₄作为营养盐混合均匀，添加蒸馏水，得到初始还原糖浓度为220g/L的发酵培养基。

2.利用如权利要求1所述的酿酒酵母的发酵培养基制备乙醇的方法，其特征在于：步骤如下：

用灭菌后的枪头从固体YPD培养基上挑取一到三个酿酒酵母的单菌落接入到装有20-40mL液体YPD培养基的锥形瓶中，所述液体YPD培养基中不添加葡萄糖，添加体积终浓度为6％的乙醇，放入摇床中以30℃、180r/min进行过夜培养；取培养后的菌液用分光光度计测其在波长660nm时的吸光度值，参照OD660与菌浓度的对应关系表取菌液于10mL离心管中，以4500-6500r/mim，10-20min离心去上清；将离心收集到的菌体接入到装有发酵培养基的锥形瓶中，放入摇床以30℃，180r/min培养；在发酵结束时，取出发酵液放入离心管中，5500-7500r/min，离心10-20min，取上清，即得包含有乙醇的上清液。

3.根据权利要求2所述的利用酿酒酵母的发酵培养基制备乙醇的方法，其特征在于：所述取菌液于10mL离心管中的菌液浓度为1*10⁸cfu/mL。

4.利用如权利要求1所述的酿酒酵母的发酵培养基制备活性干酵母的方法，其特征在于：步骤如下：

⑴菌体富集：取50mLYPD液体培养基的三角瓶，分别编号，每个三角瓶接种9mL使用酿酒酵母的发酵培养基活化的酿酒酵母的菌悬液，30℃、180r/min振荡培养过夜；

⑵离心收集菌体：将富集的菌悬液转移到离心管中，离心管对应编号，以4500r/min速率离心10min，收集菌体，使用质量浓度0.9％生理盐水9mL洗涤2次；

⑶添加保护剂：添加质量分数为10％的乳糖溶液作为保护剂，乳糖溶液与菌悬液的质量比例为1:3；

⑷稀释涂布：将添加保护剂的菌悬液混合均匀，取1mL进行稀释涂布，涂布完成的平板放进30℃恒温培养箱中静置培养2天，计活菌数；

⑸分装：同时将添加保护剂的菌悬液混合均匀，分装到玻璃平板内，每个平板的装液量为9mL，厚为0.5±0.1cm；

⑹预冷冻：分装好的玻璃平板用保鲜膜皮筋包裹，迅速放入-80℃恒温冰箱中，预冷冻3h，完成后放在-80℃恒温冰箱中保存；

⑺真空冷冻干燥：将预冷冻的玻璃平板从-80℃恒温冰箱中取出，并将平板上方保鲜膜扎孔后迅速转移到预热完成的冷冻干燥机内，此时冷冻干燥机冷阱温度-50℃，打开真空泵，抽真空冷冻干燥20h；

⑻密封保存：冷冻干燥完成的菌粉，迅速转移到超净台内，用封口膜和保鲜膜密封，即得活性干酵母，放入-20℃保存。