[发明专利]一种DKK-1核酸适配体及其应用

说明书

本发明公开一种DKK‑1核酸适配体及其应用，属于基因工程、免疫学和肿瘤学技术领域。所述的适配体为SEQ ID NO：1~5中所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列。本发明核酸适配体利用蛋白SELEX技术筛选而得，分子量较小，易于合成与修饰，能够高特异性识别并且高亲和力结合DKK‑1，与其它蛋白不发生特性结合，无免疫原性，稳定易修饰，便于合成和保存。用所述适配体制备的DKK‑1检测试剂盒和试剂纸对DKK‑1检测灵敏度高，且易于优化。在肝癌诊断、肝癌预后与监测的评估，肝癌诊断中应用。

技术领域

本发明属于基因工程、免疫学和肿瘤学技术领域，特别涉及一种DKK-1核酸适配体。

背景技术

肝癌是一个全球性问题，是世界癌症相关死亡的第二大常见原因。其发病隐匿，恶性程度高，病死率高，大多数患者就诊时已属于晚期，从而错失了最佳的治疗时机。因此，对肝癌进行早期诊断和筛查具有极其重要的意义。甲胎蛋白（AFP）是目前肝癌临床诊断使用的“金标准”，特异性可达76％至96％，但灵敏度却不到70％，在临床上约30%-40%的肝癌患者的AFP呈阴性，因此迫切需要找到具有较高敏感度和特异性的用于检测肝癌早期或更早期的新型的血清生物标志物。近年来，有研究表明，DKK-1可以作为肝癌早期的生物标记物，在肝癌患者的血清中高表达，感受性曲线（receiver operating characteristic curve,ROC曲线）提示最佳诊断值可达到2.153ng/mL。检测敏感性为69.1%，特异性为90.6%。对AFP阴性样本，DKK-1检测的敏感性和特异性分别为70.4%和90.5%，可以弥补AFP诊断能力的不足。

核酸适配体是经过筛选的得到的用于结合特定靶标的短的单链DNA‍（single-stranded DNA, ssDNA）或RNA分子，具有易于合成，免疫原性较低，分子量小（10-15kDa）等优势。因为具有与抗体类似的作用，因此又被称为“化学抗体”。核酸适配体的出现为化学生物学界和生物医学界提供了一种新的识别工具，尤其在肝癌早期诊断方面展示了良好的应用前景。目前尚未有DKK-1适配体筛选的报道，若能够筛选出能够特异性结合DKK-1的适配体，无疑为DKK-1的检测提供更宽广的平台。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种DKK-1核酸适配体及其应用。

为实现本发明目的所使用的技术方案为：

本发明的DKK-1核酸适配体，所述的适配体为SEQ ID NO：1~5中所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列。

优选的，所述的适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列的同源性为60%以上的序列。

优选的，所述的适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列进行杂交的序列。

优选的，所述的适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列进行转录的序列。

优选的，所述的适配体序列上的若干个位置被磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化或同位素化。

优选的，所述的适配体序列上结合有生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、叶酸或酶标记。

优选的，所述的DKK-1核酸适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列改造成的相应的肽核酸。

本发明还提供一种DKK-1核酸适配体在制备DKK-1检测试剂盒或检测试剂纸的应用。

本发明突出的实质性特点和显著的进步是：