[发明专利]一种Endoglin核酸适配体及其应用

说明书

本发明公开一种Endoglin核酸适配体及其应用，属于基因工程、免疫学和肿瘤学技术领域。所述的适配体为SEQ ID NO：1~5中所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列。本发明核酸适配体利用全细胞消减Cell‑SELEX技术筛选而得，分子量较小，易于合成与修饰，能够高特异性识别并且高亲和力结合Endoglin，与其它细胞不发生特性结合，无免疫原性，稳定易修饰，便于合成和保存。用所述适配体制备的Endoglin检测试剂盒和试剂纸对Endoglin检测灵敏度高，且易于优化。在肿瘤诊断、肿瘤预后与监测的评估，肿瘤诊断中应用。

技术领域

本发明属于基因工程、免疫学和肿瘤学技术领域，特别涉及一种Endoglin核酸适配体及其应用。

背景技术

肿瘤血管内皮细胞是肿瘤血管生成的基础，对肿瘤生长及转移具有非常重要的作用。针对肿瘤血管内皮细胞进行肿瘤早期诊断与治疗，已成为肿瘤相关研究发展的必然趋势。Endoglin是肿瘤血管内皮细胞表面的一种跨膜糖蛋白，在活跃增殖的血管内皮细胞中过表达，而在正常血管内皮细胞中不表达或弱表达。因此，Endoglin被公认为肿瘤血管生成和新生血管形成的特异性标记。

核酸适配体是一类能与靶分子高特异性高亲和力结合的DNA或RNA序列，具有与抗体类似的作用，常常被称为“化学抗体”。 近年来，随着核酸适配体筛选技术的不断发展，越来越多的肿瘤相关核酸适配体序列被人们所发现。然而，这些肿瘤相关的核酸适配体常常仅能识别一种肿瘤细胞或一种肿瘤，很大程度限制了核酸适配体的应用。目前，能特异性靶向肿瘤血管的适配体筛选还尚未见报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种Endoglin核酸适配体及其应用。

为实现本发明目的所使用的技术方案为：

一种Endoglin核酸适配体，所述的适配体为SEQ ID NO：1~5中所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列。

优选的，所述的适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列的同源性为60%以上的序列。

优选的，所述的适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列进行杂交的序列。

优选的，所述的适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列进行转录的序列。

优选的，所述的适配体序列上的若干个位置被磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化或同位素化。

优选的，所述的适配体序列上结合有生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、叶酸或酶标记。

优选的，所述的Endoglin核酸适配体具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中的任意一条或几条序列改造成的相应的肽核酸。

本发明还提供一种Endoglin核酸适配体在制备Endoglin检测试剂盒或检测试剂纸的应用。

本申请在筛选方法的选择上，使用Cell-SELEX筛选方法。尽管靶标分子Endoglin为一种细胞膜表面蛋白，并未使用传统蛋白筛选方法，而是使用Cell-SELEX筛选方法，并且人工构建稳定表达靶标分子Endoglin的293T细胞系（293T-hE）作为正筛选细胞。该方法有效避免了体外人工合成蛋白与细胞膜蛋白天然构象的差异，同时也解决了靶标细胞获取困难的问题。此外，本发明选择的正反筛选细胞仅具有Endoglin单一分子的表达差异，这使得筛选所获得的适配体具有更加准确的靶向性，简化了后续筛选完成时所需的靶点确认考察等相关步骤，优化了实验程序。在候选适配体的验证考察阶段，本发明得到的适配体也可与靶细胞以外的其他具有Endoglin表达的细胞（如HUVEC细胞）结合，这也证实了本发明筛选方法切实可行。