[发明专利]一种用于鉴定西瓜品种苏蜜6号种子纯度的RAPD引物及其应用

权利要求书

1.一种RAPD引物在鉴定西瓜品种苏蜜6号种子纯度方面的应用，其特征在于，所述RAPD引物包括引物JAASRP1059和引物JAASCR1036，所述引物JAASRP1059的核苷酸序列为5'-GTTGCCAGCC-3'；所述引物JAASCR1036的核苷酸序列为5'-GTGACGTAGG-3'；所述应用方法包括如下步骤：

(1)提取西瓜品种苏蜜6号的基因组DNA；

(2)以西瓜品种苏蜜6号的基因组DNA为模板，分别利用引物JAASRP1059和JAASCR1036，进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；

(4)对电泳结果进行分析，以父母本样品DNA的特异标记作为对照，只有同时具有亲本特异标记的单株才可确定为苏蜜6号杂交种，否则为杂种。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，基因组DNA的提取方法为：在西瓜品种苏蜜6号两叶一心时取幼嫩叶片1.5～3.5g，经液氮研磨，用CTAB裂解液转入1.5mL离心管中，65℃水浴0.5～1h后取出冷却，加入等体积的体积比为24:1的氯仿与异戊醇的混合物，轻轻摇晃20～30min后,12000r/min离心8～10min,取上清液用体积比为24:1的氯仿与异戊醇的混合物抽提1～2次，加入10％醋酸钠和预冷的异丙醇，4℃冰箱静置3h以上，收集絮状DNA，用70％乙醇洗涤后干燥，溶于TE中，4℃保存备用。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，PCR扩增的反应体系为18uL，其中含：20ng基因组DNA,2.0mmol·L^-1 MgCl₂，0.15mmol·L^-1dNTPs，0.44umol·L^-1 10 RAPD引物JAASRP1059或JAASCR1036，0.75U Taq DNA聚合酶。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，PCR扩增的反应程序为：94℃2min，94℃30s，37℃45s，72℃90s，40个循环，72℃10min延伸。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，琼脂糖凝胶电泳检测的电压为120V，电泳时间为0.5-1h。

6.如权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，所述父母本样品DNA的特异标记是指：利用RAPD引物JAASRP1059扩增时，产生大小分别为350bp和450bp的母本特异标记，利用RAPD引物JAASCR1036扩增时，产生大小分别为875bp和1800bp的父本特异标记，只有同时具有亲本特异标记的单株才为真正的苏蜜6号杂交种。