[发明专利]硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞在膈肌功能障碍中的应用

说明书

本发明提供硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞在膈肌功能障碍中的应用。该应用具体为培养大鼠成肌细胞L6细胞，待L6细胞生长至对数期更换无血清培养基，然后加入细菌内毒素脂多糖，并快速加入硫化氢供体继续培养；通过实验检测获取的指标用于阐明脓毒症诱导的膈肌功能障碍的机制。本发明通过给予H₂S供体NaHS时可促进LPS诱导的L6细胞的增殖并抑制其凋亡，且具有抗炎、抗氧化等作用，显著改善膈肌功能障碍，降低脓毒症大鼠的膈肌炎症；构建的脓毒症大鼠膈肌功能障碍模型对膈肌功能障碍研究和预防起到指导性作用。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞在膈肌功能障碍中的应用。

背景技术

膈肌位于胸腹腔之间，是主要的呼吸肌，呼吸功能的60％～80％由膈肌完成，故其收缩性能显著影响着呼吸效率。膈肌功能障碍是全球面临的重要临床问题，但其发病率和影响往往被忽视，且防治措施较少。感染是危重病人膈肌功能障碍的主要危险因素，脓毒症可诱导膈肌功能障碍。

近年来，硫化氢(hydrogen sulfide，H₂S)被认为是继NO和CO之后的第三种气体信号分子，参与机体多个系统的生理病理调节。在呼吸系统中，H₂S对调节肺循环、气道张力、纤维化、细胞增殖或凋亡、氧化应激及炎症等有重要功能。H₂S对平滑肌收缩性的影响在全身不同器官中都有明确的研究和报道，如血管、胃肠道、气管、膀胱、输卵管和子宫等。然而，H₂S对横纹肌收缩性的影响和对脓毒症诱导的膈肌功能障碍的研究机理却鲜有报道。

发明内容

基于现有技术中脓毒症诱导发生膈肌功能障碍的研究的局限性，本发明的目的在于提供硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞在膈肌功能障碍中的应用；本发明的目的还在于提供一种非治疗目的的脓毒症大鼠膈肌功能障碍模型的构建方法和构建获得的脓毒症大鼠膈肌功能障碍模型。通过给予H₂S供体NaHS时可促进细菌内毒素脂多糖LPS诱导的L6细胞的增殖并抑制其凋亡，且具有抗炎、抗氧化等作用，显著改善膈肌功能障碍，降低脓毒症大鼠的膈肌炎症。

本发明的目的通过以下技术方案得以实现：

一方面，本发明提供硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞在膈肌功能障碍中的应用。

上述的应用中，优选地，其包括以下步骤：

培养大鼠成肌细胞L6细胞，待L6细胞生长至对数期更换无血清培养基，然后加入细菌内毒素脂多糖(LPS)，并快速加入硫化氢供体继续培养；通过实验检测获取的指标用于阐明脓毒症诱导的膈肌功能障碍的机制。

上述的应用中，优选地，实验检测可以包括蛋白免疫印迹法、酶联免疫吸附法、EDU法、MTS法、荧光法、分光光度法、TUNEL法和ELISA法等中的一种或多种的组合。

上述的应用中，优选地，所述细菌内毒素脂多糖的用量可以为250μg/mL。

上述的应用中，优选地，所述硫化氢供体为NaHS。

上述的应用中，优选地，所述硫化氢供体的用量可以为100μmol/L。

上述的应用中，优选地，通过蛋白免疫印迹法检测获取硫化氢合成酶CSE、CBS和3-MST蛋白表达量的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞硫化氢合成酶表达量的影响。通过该检测发现L6细胞中硫化氢合成酶的表达水平明显降低，且L6细胞及细胞上清液中硫化氢的含量也明显降低；此应用能够阐明LPS导致的细胞活力的下降可能与内源性硫化氢的降低有关。

上述的应用中，优选地，通过MTS法检测获取L6细胞活力的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞活力的影响。该应用能够阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞能够提高L6细胞的活力。