[发明专利]一种人参皂苷Rg1自体脂肪干细胞体外培养方法

说明书

本发明提供一种人参皂苷Rg1自体脂肪干细胞体外培养方法，包括如下步骤：取人腹部脂肪组织；利用I型胶原酶对所述人腹部脂肪组织进行消化，得到消化组织；对所述消化组织进行原代细胞分离和接种培养，得到干细胞；取所述干细胞加入至诱导培养基中，进行传代培养；其中，培养基中包括人参皂苷Rg1；在6‑8天经胰蛋白酶消化，进行二次传代培养；取第三代脂肪间充质干细胞进行培养，收获人参皂苷Rg1自体脂肪干细胞。本发明所提供的方法所制备人参皂苷Rg1自体脂肪干细胞可大大提高干细胞的增殖率，分化能力强。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，具体地说，涉及一种人参皂苷Rg1自体脂肪干细胞体外培养方法。

背景技术

干细胞(stem cell)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。

脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)、ADSC多能细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。

目前，传统制备方法所制备出的脂肪干细胞，分化能力差、功能单一、细胞增殖率低。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的缺陷，提供了一种人参皂苷Rg1自体脂肪干细胞体外培养方法，包括如下步骤：

取人腹部脂肪组织；

利用I型胶原酶对所述人腹部脂肪组织进行消化，得到消化组织；

对所述消化组织进行原代细胞分离和接种培养，得到干细胞；

取所述干细胞加入至诱导培养基中，进行传代培养；并且，

对传代培养的培养液24小时后换液1次，以后每3天换液1次；其中，所述培养基中包括人参皂苷Rg1；

在6-8天细胞生长融合达到第一预设百分率时，经胰蛋白酶消化，进行二次传代培养；

取经过二次传代培养的第三代脂肪间充质干细胞进行培养，在生长至培养瓶底的第二预设百分率的面积时，收获人参皂苷Rg1自体脂肪干细胞。

进一步的，所述“取人腹部脂肪组织”之后，还包括：

对所述人腹部脂肪组织利用磷酸缓冲盐进行冲洗。

进一步的，所述人腹部脂肪组织的取样量为20mL。

进一步的，所述培养基中人参皂苷Rg1的浓度为10^-6mol/L-10^-8mol/L。

进一步的，所述第一预设百分率为80％-90％。

进一步的，所述第二预设百分率为70％-80％。

进一步的，所述胰蛋白酶的浓度为0.20％-0.28％。

进一步的，所述“在6-8天细胞生长融合达到第一预设百分率时，经胰蛋白酶消化，进行二次传代培养”之后，还包括：

通过倒置相差显微镜下观察在二次传代培养中原代及传代脂肪间充质干细胞形态及生长状况。