[发明专利]一种抗β-受体激动剂簇特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其分泌的单抗和应用

权利要求书

1.抗β-受体激动剂簇特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏编号为CCTCCNO.C2016208。

2.保藏编号为CCTCC NO.C2016208的杂交瘤细胞株在β-受体激动剂残留样本检测中的应用；所述β-受体激动剂选自沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、特布他林、溴布特罗和西布特罗中的一种或两种以上。

3.抗β-受体激动剂簇特异性单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为CCTCCNO.C2016208的杂交瘤细胞株分泌产生。

4.保藏编号为CCTCC NO.C2016208的杂交瘤细胞株分泌产生的抗β-受体激动剂簇特异性单克隆抗体在β-受体激动剂残留样本检测和/或β-受体激动剂残留免疫检测产品制备中的应用；所述β-受体激动剂选自沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、特布他林、溴布特罗和西布特罗中的一种或两种以上。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述免疫检测产品为免疫亲和层析色谱胶或由该胶预填装的免疫亲和层析色谱柱。

6.一种β-受体激动剂簇特异性免疫亲和层析色谱胶，其特征在于，由保藏编号CCTCCNO.C2016208的杂交瘤细胞株分泌产生单抗经纯化再与CNBr-activated Sepharose-4B胶化学交联形成固相化抗体蛋白而获得。

7.根据权利要求6所述免疫亲和层析色谱胶，其特征在于，所述纯化单抗蛋白与CNBr-activated Sepharose-4B胶的用量比：5mg纯化单抗蛋白：1ml CNBr-activatedSepharose-4B溶胀胶。

8.权利要求6所述免疫亲和层析色谱胶的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1、用保藏编号CCTCC NO.C2016208的杂交瘤细胞获取单克隆抗体蛋白并进行纯化，纯化后单抗蛋白进行透析预处理，备用；

将CNBr-activated Sepharose-4B进行溶胀、淘洗预处理后获得处理胶备用；

步骤2、向经过预处理的纯化单抗蛋白中加入步骤1所述处理胶，室温下摆动孵育，然后离心弃上清，加入NaHCO₃/NaCl缓冲溶液，室温下继续摆动孵育，离心弃上清，洗涤，获得抗体蛋白交联胶；

步骤3、取步骤2中抗体蛋白交联胶加入Tris-HCl置于室温下摆动孵育以封闭该胶中未与单抗蛋白交联的过量活化基团，离心弃上清，然后用HAC/NaCl与Tris-HCl/NaCl二种缓冲液交替离心洗涤，最后将交联胶重悬于Tris-HCl-NaCl缓冲液，于4℃保存备用，即获得所述免疫亲和层析色谱胶。

9.根据权利要求8所述制备方法，其特征在于，所述纯化后单抗蛋白进行透析预处理为：

纯化后单抗蛋白置于7500-14000MW透析袋中，再置于100-200×0.1M NaHCO₃/0.5MNaCl缓冲溶液中4℃透析过夜，每4-6h换液一次，透析后蛋白于0.22μM滤膜过滤，并于4℃保存备用。

10.根据权利要求8所述制备方法，其特征在于，所述将CNBr-activated Sepharose-4B进行溶胀、淘洗预处理为：

称取CNBr-activated Sepharose 4B固体粉末加入稀HCl溶胀，离心弃上清，加入稀HCl离心洗涤以去除CNBr-activated Sepharose 4B胶中其他小分子化学试剂后，再用NaHCO₃/NaCl缓冲溶液离心洗涤一次，备用。