[发明专利]一种将成纤维细胞体外重编为Sertoli细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用人源成纤维细胞制备Sertoli细胞的方法，包括步骤a2-1）或a2-2）：

a2-1）只增加人源成纤维细胞中NR5A1蛋白的表达量；

a2-2）只增加人源成纤维细胞中NR5A1蛋白的表达量和蛋白质组合的表达量；所述蛋白质组合由GATA4蛋白、WT1蛋白、SOX9蛋白和DMRT1蛋白中的至少一种组成，但不包括由GATA4蛋白、WT1蛋白、SOX9蛋白和DMRT1蛋白组成的情况。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述a2-1）中，只增加人源成纤维细胞中NR5A1蛋白的表达量通过向人源成纤维细胞中只导入编码NR5A1蛋白的核酸分子实现。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述a2-2）中，只增加人源成纤维细胞中NR5A1蛋白的表达量和蛋白质组合的表达量通过向人源成纤维细胞中只导入编码NR5A1蛋白的核酸分子和编码所述蛋白质组合的核酸分子实现。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白质组合为B1）-B14）中的任意一种：

B1）由GATA4蛋白组成的蛋白质组合；

B2）由SOX9蛋白组成的蛋白质组合；

B3）由WT1蛋白组成的蛋白质组合；

B4）由DMRT1蛋白组成的蛋白质组合；

B5）由WT1蛋白和DMRT1蛋白组成的蛋白质组合；

B6）由SOX9蛋白和DMRT1蛋白组成的蛋白质组合；

B7）由SOX9蛋白和WT1蛋白组成的蛋白质组合；

B8）由SOX9蛋白、WT1蛋白和DMRT1蛋白组成的蛋白质组合；

B9）由GATA4蛋白和DMRT1蛋白组成的蛋白质组合；

B10）由WT1蛋白和GATA4蛋白组成的蛋白质组合；

B11）由SOX9蛋白和GATA4蛋白组成的蛋白质组合；

B12）由WT1蛋白、GATA4蛋白和DMRT1蛋白组成的蛋白质组合；

B13）由SOX9蛋白、GATA4蛋白和DMRT1蛋白组成的蛋白质组合；

B14）由SOX9蛋白、WT1蛋白和GATA4蛋白组成的蛋白质组合。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法还包括a1）：向人源成纤维细胞中导入在Sertoli细胞中特异表达的荧光蛋白报告系统；所述在Sertoli细胞中特异表达的荧光蛋白报告系统中，由在Sertoli细胞中特异表达的启动子启动荧光蛋白的表达；

在进行所述a2-1）或a2-2）前先进行所述a1）。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述在Sertoli细胞中特异表达的启动子为AMH基因的启动子。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述AMH基因的启动子的核苷酸序列如序列表中的序列1所示。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白或红色荧光蛋白。

9.如权利要求1至8任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括a3）-a6）：

a3）完成a2-1）或a2-2）后，向人源成纤维细胞的培养体系中加入G418，得到药筛体系；

a4）完成a3）后，取所述药筛体系，培养3-7d；

a5）完成a4）后，弃液相，加入用于培养人源成纤维细胞的培养基，继续培养3-7d；

a6）从完成a5）后的培养体系中分离Sertoli细胞。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述a6）中，分离Sertoli细胞是通过分离可以发出荧光的细胞实现的。