[发明专利]一种Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用。本发明公开了一种Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞，所述Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞为过表达Nrf2的脐带间充质干细胞。Nfr2基因修饰的UCMSC对神经损伤的抵抗作用增强，可以有效拮抗氧化应激，Nfr2基因修饰的UCMSC较未修饰的UCMSC能有效促进UCMSC转化成神经干细胞。将Nfr2基因修饰的UCMSC移植在痴呆小鼠体内，Nfr2基因修饰的UCMSC能够显著改善痴呆小鼠学习记忆障碍、保护痴呆小鼠脑组织的氧化损伤、降低痴呆小鼠脑内海马AChE和NO的活性、抑制老年痴呆小鼠脑内海马组织中炎症因子的释放。本发明为制备治疗老年痴呆药物提供技术支持。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种进行性的神经退行性疾病，临床上表现为记忆和认知功能障碍，语言和行为能力缺失，患者后期表现出严重的失忆症和运动功能减弱，最终导致死亡。由于AD病程长，又缺乏有效的治疗方法，众多的AD病人给家庭和社会带来严重的负担。因此，寻找有效的AD治疗方法已成为医学界的紧迫课题。

由于血脑脊液屏障的存在，很多药物难以进入神经系统组织内，导致传统药物治疗AD受到很大限制。当前基础和临床对AD的治疗方法进行了大量的研究，主要包括一般治疗、神经递质替代疗法、病理干预疗法、神经营养疗法和干细胞疗法等。近年来，随着对AD研究的深入，干细胞治疗引起了人们的重视。研究表明脐带间充质干细胞可以有效改善阿尔茨海默病患者的学习和记忆功能。在人脐带间充质干细胞治疗阿尔茨海默病模型小鼠的研究中发现，脐带间充质干细胞可以通过调节免疫应答的途径来增加脑组织中正常神经元、神经干细胞的恢复，分化替代阿尔茨海默病的病变神经细胞，但成体干细胞在体内分化成神经干细胞的能力有限，很难达到预期的治疗效果。

核因子E2相关因子2((nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2)属于转录因子中的cap'n'collar(CNC)家族，是经典的调控机体抗氧化应激反应的核转录因子。Nrf2激活后诱导抗氧化蛋白的表达，提高机体的抗氧化应激能力。

目前，利用Nrf2基因修饰脐带间充质干细胞来制备抗老年痴呆药物，国内外尚无报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用，通过Nrf2基因修饰脐带间充质干细胞，提高了脐带间充质干细胞分化成神经干细胞的能力，Nrf2基因修饰脐带间充质干细胞移植到老年痴呆小鼠体内，对老年痴呆小鼠的学习记忆障碍、脑组织氧化损伤、海马组织中胆碱系统的损害和海马组织中炎症因子有显著的改善作用。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞，所述Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞为过表达Nrf2的脐带间充质干细胞。

本发明中，上述脐带间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。

优选地，所述Nrf2基因的序列具有如SEQ ID NO：1所示序列，或SEQ ID NO：1替换一个或多个核苷酸得到的核苷酸序列。

优选地，上述Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞由以下方法制得：

1)构建Nrf2基因重组质粒载体；

2)将所述Nrf2基因重组质粒载体转染脐带间充质干细胞，得到Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞。

本发明实施例中，Nrf2基因重组质粒载体转染脐带间充质干细胞后，得到过表达Nrf2蛋白的脐带间充质干细胞，即为Nrf2基因修饰的脐带间充质干细胞。