[发明专利]一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用。本发明公开了一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞，所述MANF基因修饰的脐带间充质干细胞为过表达MANF的脐带间充质干细胞。MANF基因修饰的脐带间充质干细胞能有效促进UCMSC转化成神经干细胞，将MANF基因修饰的UCMSC移植在大鼠体内，能够促进脊髓组织的修复和大鼠的运动功能的恢复，解决了现有的间充质干细胞移植体内后分化成神经干细胞的能力有限，治疗脊髓损伤的效果差的技术问题。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用。

背景技术

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是一种严重的中枢神经系统损伤，是造成人体截瘫的主要原因。由于其高致残率，给家庭和社会带来沉重的负担。脊髓损伤主要包括脊髓原发性损伤和继发性损伤。原发性损伤是受伤当时造成的不可逆的神经细胞死亡。继发性损伤则是患者受伤后因血液循环障碍、生物活性物质改变、炎症反应和能量代谢障碍等多个方面造成的神经细胞死亡，由于原发性损伤是不可逆的，所以减少继发性损伤是目前促进脊髓功能恢复、改善患者预后、降低脊髓损伤后致残率的关键。

近年来的研究发现，继发性神经细胞的死亡有16-50％是神经细胞的凋亡，而脊髓损伤后神经细胞凋亡的关键是局部组织的缺血缺氧，以及神经营养因子缺乏造成的微环境障碍。所以如果能够增强受损神经细胞抵抗低氧能力和给予神经营养因子改善受损细胞的微环境，就能够阻断神经细胞凋亡的级联反应，抑制或减少脊髓损伤后神经细胞凋亡，减轻脊髓的继发性损伤，改善神经功能，达到有效治疗的目的。

脊髓损伤传统的治疗主要依靠药物和外科手术，虽然可在一定程度上缓解，但疗效有限。近年来随着组织工程技术的飞速发展，为脊髓损伤的再生与修复提供了新的思路和方法。脐带间充质干细胞(UCMSC)是存在于脐带组织中的一种非造血干细胞，具有多向分化潜能，与神经干细胞、胚胎干细胞等其他可用于移植的干细胞比较，具有取材方便、易于体外扩增、免疫排反应弱、可进行基因技术加工等优点。UCMSC移植治疗脊髓损伤，使损伤轴突再生、突触重建和恢复脊髓部分功能成为可能。但由于间充质干细胞移植体内后分化成神经干细胞的能力有限，治疗效果始终难以达到预期目的。

因此，能够有效促进移植到体内的间充质干细胞分化成神经干细胞，对脊髓损伤达到预期的治疗效果，是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

本发明提供了一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞及其制备方法与应用，解决了现有的间充质干细胞移植体内后分化成神经干细胞的能力有限，治疗脊髓损伤的效果差的技术问题。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞，所述MANF基因修饰的脐带间充质干细胞为过表达MANF的脐带间充质干细胞。

本发明中，上述脐带间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。

优选地，所述MANF基因的序列具有如SEQ ID NO：1所示序列，或 SEQ ID NO：1替换一个或多个核苷酸得到的核苷酸序列。

优选地，MANF基因修饰的脐带间充质干细胞由以下方法制得：

1)构建MANF基因重组质粒载体；

2)将所述MANF基因重组质粒载体转染脐带间充质干细胞，得到MANF 基因修饰的脐带间充质干细胞。

本发明中，MANF基因重组质粒载体转染脐带间充质干细胞后，得到过表达MANF蛋白的脐带间充质干细胞，即为MANF基因修饰的脐带间充质干细胞。

优选地，MANF基因重组质粒载体的载体为慢病毒载体。

更优选地，慢病毒载体载体为pWPXL质粒。