[发明专利]一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法

权利要求书

1.一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤包括

(1)选择优质水稻品种为母本，有明确抗病基因水稻品种为父本，进行杂交，获得F1代种子，种植F1代种子，获得F2种子；

所述优质水稻品种为携带或不携带抗病基因的水稻品种，所述有明确抗病基因水稻品种为含有抗白叶枯病基因的水稻品种；

(2)将步骤(1)中F2种子脱壳成糙米，选取无垩白的完整糙米并将其切成两个半粒，一一对应，其中有胚乳的半粒发苗、取样，并分子标记检测抗病基因；其中没有胚乳的半粒刮去种皮和糊粉层后碾磨成精米粉，用于测定单粒种子直链淀粉含量；

直链淀粉含量的检测具体包括如下步骤：

A、样品吸光度值的测定

称取步骤(2)中精米粉样品10mg，置于10mL容量瓶中，加入0.1mL 95％乙醇溶液，轻摇容量瓶使样品湿润分散，加入0.9mL 1.00mol/L的氢氧化钠溶液，使碱液沿颈壁缓慢留下，旋转容量瓶，使碱液冲洗粘附于瓶壁上的样品，将容量瓶置沸水浴中煮10min后取出，冷却至室温后加蒸馏水定容，充分摇匀，静置20min，吸取0.5mL样品溶液，加入已盛有5mL蒸馏水的试管中，再在试管中加入0.1mL 1.00mol/L的乙酸溶液，使样品酸化，加入0.2mL碘液，充分摇匀，用蒸馏水定容，静置20min，再以0.09mol/L的氢氧化钠溶液代替样品，配制空白溶液，用空白溶液于分光光度计波长620nm处调节零点并测出有色样品液的吸光度值；

B、标准曲线的绘制

称取与待测样品保存在同样条件下三天以上的直链淀粉含量为1.5％、10.4％、16.2％、26.5％4个标准样品，方法同步骤A，再以标样的直链淀粉含量为纵坐标，以相对应的吸光度为横坐标，绘制标准曲线；

C、直链淀粉含量的计算

将步骤A中测得的吸光度值带入步骤B绘制的标准曲线，计算直链淀粉含量；

(3)筛选步骤(2)中含纯合抗病基因、直链淀粉含量在13-18％之间的幼苗进行移栽，选择综合农艺性状优良的单株，系谱法选育，室内考种、筛选，自交至F7代；

(4)测定F7代不同株系种子的各项品质指标，选择优质品系，即得优质抗病水稻品种。

2.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(1)中所述母本与父本千粒重不低于22g。

3.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(2)中，选取无垩白的完整糙米不低于3000粒，其中含胚乳的半粒糙米置于96孔PCR板中发芽至两叶一心，无胚乳的半粒置于另一PCR板中，一一对应编号。

4.根据权利要求3所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(2)中，标记检测抗病基因具体包含如下步骤：根据抗病基因序列设计特异性扩增引物，提取待测样品基因组DNA，并以待测样品基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得的PCR扩增产物经电泳检测后，记录样品DNA的特征谱带；

其中，所述提取待测样品基因组DNA的具体步骤包括：

对应剪取96孔PCR板的幼苗一个叶片，装入96孔深孔板中，放入-80℃冰箱冷冻1h，用组织捣碎仪打碎样品，加入300uL含200mM PH8.0 Tris-HCL、25mM PH8.0 EDTA、1％SDS的提取液，充分混匀，加入150uL 7.5M NH₄AC溶液，轻摇2min，4000r/min离心15min，抽提上清200uL置新的96孔深孔板中，加入2倍体积冰冻无水乙醇，4000r/min离心15min，弃上清，于室温下充分干燥，加双蒸水溶解DNA，即为待测样品基因组DNA，4℃下保存备用。

5.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(4)中所述品质指标为NY/T 593-2013食用稻品种品质指标。