[发明专利]一种稳定表达人源CaSR基因的细胞模型及其构建方法在审
| 申请号： | 201810715685.6 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN110656088A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 刘剑峰;殷学梁;汤恒敏;王素云 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 42201 华中科技大学专利中心 | 代理人： | 夏惠忠 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 保藏 细胞模型 基因 活性物质 稳定表达 筛选 靶点 构建 标签 时间分辨荧光技术 中国仓鼠卵巢细胞 中国典型培养物 哺乳动物细胞 重组质粒转染 钙敏感受体 表达载体 联合应用 连接序列 药物筛选 重组质粒 低成本 高通量 寡聚化 细胞株 可控 可用 人源 通量 蛋白 融合 研究 | ||
1.一种表达人源CaSR基因的细胞模型，其特征在于，它是中国仓鼠卵巢细胞CHO-CaSR，已于2018年5月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201893，保藏地址为中国武汉，武汉大学。
2.一种细胞模型，其特征在于，该细胞模型是携带并能表达CaSR基因的哺乳动物细胞，所述CaSR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求2所述的细胞模型，其特征在于，所述哺乳动物细胞是CHO细胞或HEK293细胞。
4.权利要求1～3中的任意一项所述的细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将SNAP标签与CaSR基因通过SEQ ID NO:4所示的连接序列相连，得到融合有SNAP标签的CaSR基因；
(2)将融合有SNAP标签的CaSR基因与表达载体连接，构建含有CaSR基因的重组质粒pcDNA5/FRT Flag-Snap-CaSR(human)；
(3)将上述重组质粒转染哺乳动物细胞，经过药物筛选，培养成能稳定表达CaSR基因的细胞株，该细胞株即为所述的细胞模型。
5.根据权利要求4所述的细胞模型的构建方法，其特征在于，在步骤(2)后还包括对细胞株进行综合评估的步骤：在细胞株中加入CaSR特异性激动剂或CaSR特异性抑制剂，测定下游信号应答反应，根据应答反应结果评估该细胞株是否作为细胞模型。
6.根据权利要求4所述的细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述的表达载体为pcDNA5/FRT。
7.根据权利要求6所述的细胞模型的构建方法，所述的质粒pcDNA5/FRT含有FRT位点。
8.根据权利要求4所述的细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述的哺乳动物细胞为Invitrogen商品化细胞系Flp-in-CHO细胞。
9.根据权利要求5所述的细胞模型的构建方法，其特征在于，所述的CaSR特异性激动剂为CaCl2、MgCl2或Spermine，所述的CaSR特异性抑制剂NPS 2143hydrochloride。
10.权利要求1～3中的任意一项所述的细胞模型在筛选以CaSR为靶点的活性物质中的应用。
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