[发明专利]一种用四氯化碳诱导慢加急性肝衰竭小鼠模型的方法

说明书

本发明涉及一种慢加急性肝衰竭小鼠模型诱导方法，尤其涉及一种用四氯化碳诱导慢加急性肝衰竭小鼠模型的方法，方法的步骤如下:分组方法，Balb/c近交系小鼠随机平均分为模型组和对照组；给药方法，将四氯化碳用橄榄油稀释至10%和50%的浓度，模型组小鼠按照5至8ml每kg体重持续腹腔注射10%四氯化碳，每周给药两次，连续给药8周；8周后按照5至8ml每kg体重给予一次腹腔注射50%四氯化碳；检测方法，对实验小鼠进行生化指标检测和肝脏病理学检查。有益效果：采用Balb/c近交系小鼠作为模型动物，其多可采用近交系，重复性更好，且相对于大鼠成本更低，操作更为简便。本模型更符合临床乙型肝炎病毒（HBV）相关慢加急性肝衰竭的疾病发展过程。

技术领域

本发明涉及一种慢加急性肝衰竭小鼠模型诱导方法，尤其涉及一种用四氯化碳诱导慢加急性肝衰竭小鼠模型的方法。

背景技术

动物肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题。通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有重要的现实意义。

四氯化碳（CCl₄）被广泛用于诱导肝损伤动物模型，CCl₄代谢产生的自由基进入机体后，在肝脏经细胞色素P450激活，生成三氯甲基自由基和三氯甲基过氧自由基，攻击肝脏细胞膜上的磷脂分子，使得细胞膜、内质网膜发生氯烷化和脂质过氧化，损伤细胞膜、细胞器；还能与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，影响蛋白质代谢，并且破坏膜结构和功能的完整性，钙离子内流增加，影响细胞正常生理功能，最终导致肝细胞胞质中的可溶性酶渗出，细胞死亡。

据有关文献报道，刘旭华等曾应用四氯化碳和D-氨基半乳糖及脂多糖建立了慢加急性肝衰竭大鼠模型，但大鼠模型建立成本高，操作难度较小鼠大。

张慧芸等应用四氯化碳联合D-氨基半乳糖、脂多糖诱导慢加急性肝衰竭小鼠模型。该模型的缺点在于造模所需肝损伤药物太多，为该疾病的后续研究造成更多干扰因素，结合临床更为常见的HBV相关慢加急性肝衰竭，多数为HBV病毒这一独立因素诱发发病。

发明内容

综上所述，本发明有必要提供一种用四氯化碳诱导慢加急性肝衰竭小鼠模型的方法，通过优选实验动物，优化诱导方法，获得更加稳定可靠的慢加急性肝衰竭小鼠模型。

一种用四氯化碳诱导慢加急性肝衰竭小鼠模型的方法，其步骤具体如下:

a.分组方法：Balb/c近交系小鼠随机平均分为模型组和对照组；

b.给药方法：将四氯化碳用橄榄油稀释至10%和50%的浓度，模型组小鼠按照5至8ml每kg体重持续腹腔注射10%四氯化碳，每周给药两次，连续给药8周；8周后按照5至8ml每kg体重给予一次腹腔注射50%四氯化碳；对照组小鼠则在相同时间腹腔注射相同剂量的橄榄油；

c.检测方法：对实验小鼠进行生化指标检测和肝脏病理学检查。

优选的，生化指标检测检测方法为：小鼠给予乙醚麻醉后，分时点进行摘眼球取血，收集的小鼠全血离心后留取上清，采用生化检测试剂盒检测丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平。

优选的，摘眼球取血时点为0h、6h、12h、24h、48h。

优选的，肝脏病理学检查方法为：分时点收集肝脏组织标本，10%中性甲醛固定后制作石蜡切片，苏木精-伊红染色法及天狼星红染色。

优选的，收集肝脏组织标本时点为6h、12h、24h、48h。

优选的，模型组小鼠按照5ml每kg体重持续腹腔注射10%四氯化碳，每周给药两次，连续给药8周。