[发明专利]细胞群中的稀有细胞判读方法

说明书

本发明涉及生物统计分析领域，具体而言，涉及一种细胞群中的稀有细胞判读方法，所述方法通过检测细胞系某靶点的不同表达水平，计算细胞比值R(R为细胞的阳性信号值F/细胞的阴性信号值F')，用ROC曲线分析阳性细胞组比值和阴性组细胞比值，得到比值阈值Rt。同时计算荧光阈值(细胞群的F的平均值)+ns(s为细胞群的F的标准偏差)，得到荧光阈值Ft，根据比值R与Rt的关系及F与Ft的关系即可判读细胞的阴阳性。与现有技术相比，该方法简单、快捷、准确性高、一致性好。

技术领域

本发明涉及生物统计分析领域，具体而言，涉及一种细胞群中的稀有细胞判读方法。

背景技术

细胞群中的稀有细胞判读是生物学或医学领域常见目的；其中常见应用例如从血液细胞中寻找循环肿瘤细胞(Circulating tumor cell,CTC)。

循环肿瘤细胞是肿瘤原发灶组织部位脱落进入血液循环的肿瘤细胞，大量实验证实CTC的检测有助于肿瘤复发转移的监控、患者预后的判断及患者术后治疗的指导^[1,2]。CTCs的检测分析方法较多，常见的技术包括流式细胞分析、基因芯片、反转录-聚合酶链反应、免疫荧光技术等^[3]。目前，CTCs免疫荧光检测已上市产品主要有强生公司的Cellsearch检测系统、武汉友芝友医疗科技股份有限公司的CTC-Biopsy检测系统等。

Cellsearch检测系统对于肿瘤细胞的判定标准一般为：1)具有典型细胞形态，2)具有细胞核形态，3)细胞形态有区别于白细胞形态，4)CK染色为阳性，5)CD45染色为阴性，6)形态比例大于4×4μm，7)CK染色较背景色至少3倍以上，8)细胞膜CK染色区域至少50％以上，9)细胞膜CK染色较均匀，而非点状染色^[4]。该分析系统虽然已经引入了计算机分析方法，经计算机辅助可以快速对肿瘤细胞进行判定，但仍然需要分析者对结果进行复核，而给出的判定指标并没有用数字进行量化，仍然很大程度上依赖分析者的主观印象，且基于简单的计算机辅助容易造成信息的丢失，导致结果误判。也有研究基于cellsearch检测系统，制定HER2阳性细胞的判读方法，该判读方法用相对比值(细胞HER2染色荧光值/细胞面积)/(背景荧光强度值/细胞面积)^[5]。该方法虽然用相对简单的数值直接对HER2阳性细胞进行了定义，但该方法容易受背景染色影响，且结果容易出现假阳性。

CTC-Biopsy检测系统是基于细胞的病理状态来进行CTC的判定，该系统虽然收集总结了目前大量细胞病理专家提出的CTC细胞形态标准，同时也与全国多家三甲医院的细胞病理专家一起进行了大量的免疫组化验证工作，但该系统对于分析者的要求苛刻，要求分析者必须是经过严格训练且具有一定水平的病理知识才能完成结果的判读，在实际操作中，对于同一份结果往往需要参考至少两位分析者严格的分析结果，这对于临床检验是不小的挑战^[6]。正如目前临床上作为金标准的免疫组化，其判读方法也是基于大量细胞病理知识建立，但在临床上，其对于判读者的要求极其苛刻，且不同分析者对于同一份结果的判读存在一定的差异。

因此，建立简单、快捷、准确的免疫荧光阳性细胞判读方法极为重要。

参考文献

[1]E Crowley,NF Di,F Loupakis,A Bardelli.(2013)Liquid biopsy:monitoring cancer-genetics in the blood.Nature Reviews Clinical Oncology 10(8):472.

[2]G Brock,E Castellanos-Rizaldos,L Hu,et al.(2015)Liquid biopsy forcancer screening,patient stratification and monitoring.Translational CancerResearch 4(3).