[发明专利]具热稳定性和群体感应淬灭活性菌株ZD03的筛选和培养方法

权利要求书

1.具热稳定性和群体感应淬灭活性菌株ZD03的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，菌株分离纯化，从养殖生态环境中取实验样品，稀释后涂布于2216E 平板，30℃ 培养2-3 d后挑取单菌落，多次划线分离纯化, 然后接于斜面,得到纯化菌株ZD03；

步骤二，群体感应淬灭活性检测，将涂有X-gal的MM培养基平板切成条状,在细条一侧加入步骤一得到的纯化菌株ZD03与AHLs混合物,在另一侧依次加指示菌WCF47，30 ℃培养18 h后，观察实验结果，挑取指示菌菌落为白色的纯化菌株ZD03，得到具群体感应淬灭活性菌株ZD03；

步骤三，热稳定性筛选，将步骤二得到的具群体感应淬灭活性菌株ZD03接至装有50ｍＬ无菌水的三角锥型瓶中摇匀，再将菌液分别80 ℃水浴10 Min，然后平皿涂布培养2-3d，挑取单菌落，得到具热稳定性和群体感应淬灭活性菌株ZD03。

2.权利要求1所述的具热稳定性和群体感应淬灭活性菌株ZD03的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，种子液配置，挑取活化的具热稳定性和群体感应淬灭活性菌株ZD03，接种至LB培养基，36 ℃，180 r·min^-1，摇培16 h，得到ZD03菌株种子液；

步骤二，优化培养基配置，按照优化培养基配方，淀粉1.88 g·L^-1、NaCl 6.83 g·L^-1、麦芽糖5.60 g·L^-1、酵母膏10 g·L^-1、蛋白胨10 g·L^-1、牛肉膏15 g·L^-1、葡萄糖2 g·L^-1、MgSO₄ 3 g·L^-1，配置得到优化培养基；

步骤三，优化培养基灭菌，将步骤二得到的优化培养基pH值调至7.2后分装至三角锥形瓶，然后121℃高压灭菌30min，得到灭菌优化培养基；

步骤四，发酵培养，从步骤一得到的ZD03菌株种子液中吸取1 mL于步骤三得到的灭菌优化培养基中，36 ℃，180 r·min^-1，摇培72 h。

3.根据权利要求2所述的具热稳定性和群体感应淬灭活性菌株ZD03的培养方法，其特征在于，所述步骤三中分装至三角瓶按照每100 mL三角瓶装60 mL培养基的规格。