[发明专利]用高效液相色谱检测L-氯糖差向异构体的方法

说明书

本发明公开了一种用高效液相色谱法检测L‑氯糖差向异构体的方法，该方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为调料的色谱柱，用双流动相，即流动相A和流动相B进行梯度洗脱，分离效果好，操作简便易行；本发明采用特定稀释剂以保证L‑氯糖在检测过程中稳定的稳定性。试验结果证明本发明的色谱条件和试验方法能够有效分离L‑氯糖和其差向异构体，并且可以有效抑制L‑氯糖在分析过程中的降解，从而准确测定L‑氯糖及其差向异构体的含量。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种用高效液相色谱检测L-氯糖差向异构体的方法。

背景技术

替比夫定片（Telbivudine）是由诺华制药于2006年10月25日在美国审批通过，商品名“TYZEKA”（素比伏），主要用于有病毒复制证据以及有血清转氨酶(ALT或AST)持续升高或肝组织活动性病变证据的慢性乙型肝炎成人患者。对核苷类似物逆转录酶抑制剂耐药的慢性乙型肝炎患者，尚无应用替比夫定的设计良好的对照研究，但估计其可能与拉米夫定存在交叉耐药。替比夫定属于美国FDA药物妊娠安全性分类的B类药物。临床前研究中替比夫定无致畸性，且显示其对胚胎和胎仔发育无不良作用。其原料药于2007年2月15日以化药1.1类批准上市销售。L-氯糖为合成替比夫定的起始物料。

L-氯糖有3个手性中心，其本身是一种α构型，其差向异构体为β构型（杂质A），其含量直接影响目标产物替比夫定的收率及质量，但目前并没有关于L-氯糖的差向异构体的分析文献报道。

发明内容

L-氯糖在合成的过程中可能引入的有关物质主要有4个，包括起始物料、中间体及副产物，其结构如下：

有关物质3

为了保证替比夫定原料的收率及质量，严格控制其异构体的限度，同时弥补现有技术缺乏对L-氯糖差向异构体分离分析技术的不足，本发明的发明人开发了一种利用高效液相色谱法分离L-氯糖差向异构体的方法，从而保证L-氯糖的收率，进而保证其作为起始物料的目标产物-替比夫定的收率及质量可控性。

在研究过程中，本发明的发明人发现，因为L-氯糖本身不够稳定，用甲醇或乙腈对其进行溶解的过程中，会和溶剂发生反应进而降解，产生新的杂质，严重干扰对其本身质量的评估，造成检测结果不准确，数据不可靠，不能反应L-氯糖的真实情况。

经过大量实验和研究对溶剂进行筛选，本发明的发明人最终获得一种最佳的溶剂配比，以及一种检测L-氯糖差向异构体的高效液相色谱检测方法，能够保证L-氯糖在检测期间的稳定性以及检测结果的准确度，能够实现L-氯糖和其差向异构体的有效分离，还能够准确测定此异构体的限度，专属性强，灵敏度高，该操作方法简单，具有简便、快速的优点。所述方法包括如下步骤：

1）配置L-氯糖的对照品溶液和供试品溶液；

2)用高效液相色谱检测系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液，色谱条件：使用C18色谱柱;采用双流动相，即流动相A和流动相B进行梯度洗脱，所述流动相A为缓冲盐溶液，所述流动相B为有机相溶液；

3) 根据供试品溶液的色谱图和对照品溶液的色谱图，确定供试品溶液中有关物质的限度。

本发明用高效液相色谱法检测L-氯糖差向异构体，在对系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液配制的过程中，要用到特定的稀释剂。

所述缓冲盐溶液为磷酸铵缓冲液和醋酸铵缓冲液的一种，优选为醋酸铵缓冲液。

所述有机相为乙腈溶液和甲醇溶液的一种，优选为乙腈溶液。

所述特定的稀释剂为一定浓度的乙腈溶液，优选为50%乙腈溶液。