[发明专利]一种同时靶向人p185和血管内皮生长因子的重组抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种同时靶向人源化p185和VEGF的双特异性抗体及其应用。其由以下四条肽链组成：(1)两条完全相同的抗体轻链，和，(2)两条完全相同的重组抗体重链；其中，所述的抗体轻链是识别p185抗原表位或抗原的抗体的轻链，所述的重组抗体轻链的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；所述的重组抗体重链从N端至C端依次为：①识别p185抗原表位或抗原的抗体的重链可变区，②抗体重链恒定区，③柔性连接短肽，和，④具有结合VEGF能力的受体结构域，所述的重组抗体重链的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。其具有同时结合p185和VEGF的能力，并能够抑制血管内皮细胞和肿瘤细胞的增殖，在T淋巴细胞中会显著促进IFN‑γ表达，是优良的抗肿瘤的抗体药物。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种同时靶向人p185和血管内皮生长因子的重组抗体及其制备方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤是在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物。2015年中国新发肿瘤病例数达4,292,000例，严重危险人类健康。

肿瘤分子生物学研究证实人表皮生长因子受体2(human epidermal growthfactor receptor,HER2)基因和Myc基因等癌基因异常活化引起细胞信号传导通路失调，进而导致细胞无限增殖是肿瘤发生的分子机制。HER2是表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor,EGFR)家族成员，位于人染色体17q21。HER2编码由1255个氨基酸组成的，具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白p185。P185由胞外的配体结合区、单链跨膜区及胞内的蛋白酪氨酸激酶区(720-987位氨基酸)三部分组成，过度活化的p185蛋白通过激活膜受体酪氨酸蛋白激酶信号传导通路(Ras/Raf/MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/AKT)信号传导通路及转录激活(STAT)信号传导通路发挥促进细胞增殖的作用。

肿瘤细胞的无限增殖消耗大量的营养成分。在肿瘤生长的初始阶段，周围组织的渗透作用负责提供维持其生长的营养成分。当肿瘤生长到2.0mm3时，即有新生血管长入，否则其中心部分将因缺乏营养供应出现缺血坏死，肿瘤组织也很难继续生长。肿瘤细胞分泌的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生长因素，它是诱导肿瘤血管生成作用最强、特异性最高的生长因子。VEGF基因位于染色体6p21.3，由8个外显子和7个内含子组成，其编码产物是二聚体糖蛋白。VEGF不仅能提高内皮细胞胞浆内钙离子的浓度，还能增加微血管对大分子物质的通透性。

上述肿瘤分子生物学的研究进展为抗肿瘤药物研发理念的更新提供了坚实的科学依据。目前，抗肿瘤药物研发的焦点已从传统的研发细胞毒药物转移到研发针对肿瘤细胞内细胞信号传导通路失调关键靶点的特异性新一代抗肿瘤药物。靶点特异性抗肿瘤药物，特别是抗体药物，以正常细胞和肿瘤细胞之间基因表达差异为依据，发挥高特异性和低毒性的治疗效果。

发明内容

本发明想要解决的技术问题是，针对缺乏肿瘤药物的缺陷，提供一种同时靶向p185和VEGF双特异性的重组抗体及其制备方法和应用，其具有同时结合p185和VEGF的能力，并能够抑制血管内皮细胞和肿瘤细胞的增殖。