[发明专利]一种通用性CAR-T细胞、制备方法及应用

权利要求书

1.一种通用性CAR-T细胞，其特征在于，所述通用性CAR-T细胞可识别多肽GCN及GCN-自身抗体亲和肽融合多肽，在不同GCN-自身抗体亲和肽融合多肽引导子的引导和调控下，靶向识别并杀伤不同的自身反应性B细胞。

2.根据权利要求1所述一种通用性CAR-T细胞，其特征在于，所述通用性CAR-T细胞嵌合抗原受体包括CD3ζ区、共刺激区、跨膜区、铰链区、抗GCN单链抗体区及信号肽，所述抗GCN单链抗体区基因序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求2所述一种通用性CAR-T细胞，其特征在于，所述CD3ζ区携带SEQ IDNO:2所示基因序列，所述共刺激区携带SEQ ID NO:3所示基因序列，所述跨膜区携带SEQ IDNO:4所示基因序列，所述铰链区携带SEQ ID NO:5所示基因序列，所述信号肽携带SEQ IDNO:6所示基因序列。

4.权利要求1~3任一项所述通用性CAR-T细胞的制备方法，其特征在于：

合成抗GCN单链抗体区，其序列如SEQ ID NO:1所示；

合成含有Hinge-TM-CD137-CD3ζ 基因序列的质粒pCD-HTCC；

将质粒pCD-HTCC与载体pCDH-CMV-MCS 连接获得载体pCDH-CD137-CD3ζ；

将anti-GCN scFv与载体pCDH-CD137-CD3ζ相接获得质粒psv-CAR；

将质粒psv-CAR转至活化T细胞，获得通用性CAR-T细胞。

5.权利要求1~3任一项所述一种通用性CAR-T细胞在治疗自身免疫性疾病药物中的应用，其特征在于，所述自身免疫性疾病是由自身反应性B细胞引起，所述通用性CAR-T细胞需通过GCN-自身抗体亲和肽融合多肽引导子的引导和调控，所述GCN-自身抗体亲和肽融合多肽引导子能与所述CAR-T细胞的抗GCN单链抗体区结合。

6.根据权利5所述的应用，其特征在于，所述GCN-自身抗体亲和肽融合多肽引导子包括多肽GCN、连接子以及自身抗体亲和肽，所述多肽GCN氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述连接子氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述自身抗体亲和肽通过所述连接子与所述多肽GCN的N端或C端连接。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括自身免疫性肾病。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述通用性CAR-T细胞通过PpN与PpC的引导与调控在治疗特发性膜性肾病药物中的应用；

所述通用性CAR-T细胞通过PaN及PaC的引导与调控在治疗IgA肾病药物中的应用；

所述通用性CAR-T细胞通过PdN及PdC的引导和调控在治疗狼疮性肾炎药物中的应用；

所述通用性CAR-T细胞通过PmaN及PmaC的引导和调控在治疗MPO型-ANCA相关血管炎药物中的应用；

所述通用性CAR-T细胞通过PpaN及PpaC的引导和调控在治疗PR3型-ANCA相关血管炎药物中的应用；

其中，所述PpN与PpC的自身抗体亲和肽氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示，所述PaN与PaC的自身抗体亲和肽氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述PdN及PdC的自身抗体亲和肽氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，所述PmaN及PmaC的自身抗体亲和肽氨基酸序列如SEQ IDNO:22所示，所述PpaN及PpaC的自身抗体亲和肽氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示。

11.根据权利要求6或10所述的应用，其特征在于，PpN氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，PpC氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，PaN氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，PaC氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，PdN氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，PdC氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，PmaN氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示，PmaC氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示，PpaN氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，PpaC氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。