[发明专利]一种斑马鱼老年疾呆模型的建立方法及应用

说明书

本发明具体涉及一种建立斑马鱼老年疾呆模型的方法及应用，包括葡萄糖培养液和冈田酸培养液，所述葡萄糖培养液与冈田酸培养液交替用于培养斑马鱼，葡萄糖培养液或冈田酸培养液的单次培养时间为22～26小时。本发明首次公开了通过采用特定浓度的葡萄糖培养液和冈田酸培养液交替培养斑马鱼，能快速有效造成斑马鱼老年疾呆样症状的出现，从而极大减少了冈田酸的药物用量，节约了实验资源。

技术领域

本发明具体涉及一种用于建立斑马鱼老年疾呆模型的方法及其应用，属于动物模型制备技术领域。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种以智能减退为主要特征的老年中枢神经系统退行性疾病。随着人口老龄化的加剧，其发病率逐年升高。通常65岁以后缓慢起病，表现为以记忆障碍为主的认知功能障碍，进行性加重并难以逆转，最终导致痴呆和功能障碍，严重影响老年人认知功能和生活能力，同时加重家属和社会护理和经济负担。故早期诊断、及时治疗和有效预防成为重要临床和科研问题。针对AD目前尚无有效的药物治愈方法，但流行病学研究表明,AD的发生与一些心血管危险因素和社会心理因素等有密切关系，如吸烟、高血压、糖尿病等可通过导致脑血管性和神经退行性疾病促使老年痴呆临床发病，糖尿病，高血压，抑郁，肥胖等都列为老年痴呆的风险因素。

糖尿病患者发生老年痴呆的风险是正常人的2倍左右，有研究认为70％的Ⅱ型糖尿病患者会最终发展为老年痴呆，研究发现很多糖尿病患者虽然没有老年痴呆症状，但已经可以观察到老年痴呆的病理变化如脑皮质较薄(这代表脑神经元可能已经出现损伤)、老年痴呆特有的脑毒性物质Tau蛋白水平升高等。有学者认为I型和Ⅱ型糖尿病是身体对糖的利用能力下降(胰岛素减少或胰岛素抵抗)，从而造成血糖升高，血糖波动增大；而老年痴呆的重要病因和表现就是到大脑糖代谢异常，大脑对糖的利用也显著减少，所以将老年痴呆称为“3型糖尿病”。同时也发现，脑中糖代谢的减少在老年痴呆的早期或前期就已经出现，而且这种糖代谢异常的机制和糖尿病几乎重合，也是胰岛素抵抗或胰岛素水平异常，这些代谢异常会妨碍大脑对老年痴呆特有的脑毒性物质—Tau蛋白等的清除，形成老年痴呆特有的脑中的“老年斑”，进而造成大脑功能障碍或萎缩。

利用整体动物模型开展的体内实验，将受试样品置于复杂的机体内环境下，能客观反映样品在体内的代谢规律和作用机制，及体内各器官相互作用下机体的反应，所获得的结果可靠性高，参考价值大。

中国专利文献CN1781019(申请号CN200480006554.7)公开了一种药理学的非人类动物模型的开发，该模型使在具有阿尔茨海默病的受检者的脑中发现的组织病理学特征与记忆丧失相关联。在一个实施方案中，在年轻的成年Long-Evans大鼠的左脑室内连续四周灌注一种Fe2+、Aβ42、buthionine sulfoximine(FAB)溶液诱发了记忆损伤并伴随着脑脊液中高磷酸化Tau蛋白水平的升高，该专利用的大鼠培养成本高、繁殖周期长，很难实现化合物活性的快速、高通量筛选。

斑马鱼作为一种理想的脊椎模式生物，与其他哺乳动物模型比，斑马鱼具有产卵量高，发育周期短，药物用量少，可重复性强优势。斑马鱼单胺类神经系统与哺乳动物极为相似，通过给予斑马鱼不同刺激条件，其复杂的行为模式与精神神经障碍行为均能得到良好体现，斑马鱼被广泛应用神经发育学、神经生物学、神经损伤和行为学等神经科学研究。在已有研究中，如梯形测试箱试验中，已确定评价斑马鱼焦虑与恐惧、药物依赖与戒断等精神状态的行为学指标，例如呆滞及异常游泳动作频率、顶部停留时间、上下穿梭次数及游动速度与距离等参数，均是斑马鱼行为学模型研究中常用的特征性评价指标。因此，利用斑马鱼研究人类神经系统疾病具有较好的适用性及良好的发展前景。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出了一种斑马鱼老年疾呆模型的建立方法。

本发明还提出了一种斑马鱼老年疾呆模型的应用。

本发明的技术方案如下：