[发明专利]一种集检测载体与信号产生于一体的温度计快速检测方法

说明书

本发明公开了一种基于氧化石墨烯光热效应的集检测载体与信号产生于一体的温度计检测方法，利用温度计作为载体，基于纳米材料的特性组建灵敏、快速的检测目标待测物的方法。温度计作为检测方法载体，同时可以对光热效应产生的温度变化进行读数，简化了整个方法的操作步骤，极大地降低了检测成本，而且检测灵敏度明显优于免疫试纸条，有助于检测方法的广泛应用。

技术领域

本发明涉及一种集检测载体与信号产生于一体的温度计快速检测方法，属于检测技术领域。

背景技术

建立一种简便、灵敏的食品危害物的快速检测方法是保障食品安全的有效途径。目前已建立的针对食品中危害物的快速检测方法多以酶标板、试纸条等作为载体，包括酶联免疫法，免疫试纸条和免疫传感器等。酶联免疫法灵敏度相对较高但操作复杂，且需要酶标仪不适合现场快速检测。试纸条方法操作简便、成本较低，可采用目测或读卡器等简易检测设备得到定性或半定量分析，但该检测方法灵敏度相对较低。另外，试纸条常用的载体硝酸纤维素膜的组成成分复杂，膜与抗体等蛋白的结合受多种因素影响，同时在操作过程中易碎、易折和产生划痕等原因使试纸条的灵敏度和稳定性都有待提高。因此寻找稳定、适合操作的检测载体成为研究者的研究热点。

光热效应目前主要应用于癌症的光热治疗和生物成像等方面，直接将光热效应应用于建立检测方法的研究较少。Dovichi等人将激光照射产生的热透镜效应用于热量跟踪分析，是目前最早将光热效应应用于建立检测方法的研究。Qin等人利用胶体金的光热效应，建立了温度升高值与待测物浓度的标准曲线，与试纸条目测检测方法相比，该方法的检测灵敏度提高了32倍。Huang等人将光热效应应用于检测2,4,6-三硝基甲苯，检测限可达14ng/cm。在本课题组之前的研究工作中：Zhou等人建立了一种基于纳米复合材料光热效应的癌细胞渗滤式试纸条的检测方法，检测限可达600个细胞。Zhang等人建立了一种基于氧化石墨烯功能化免疫磁珠的循环肿瘤细胞检测方法，建立了氧化石墨烯照射后的温度升高值与循环肿瘤细胞的数目之间的标准曲线，检测限可达100个细胞。但是，上述采用光热效应建立的相关检测方法，其温度变化需要通过热像仪记录或者红外测温枪读取，增加了实验成本。

光热转换材料具有光热效应被广泛应用于肿瘤的诊断和光热治疗。但是目前检测方法中，直接将光热材料的光热效应应用于建立快速检测方法的研究相对较少，而且光热效应建立的相关检测方法中检测温度的仪器(热像仪)的成本较高(约4万元)，限制了其广泛的使用性和普及性。因此，开发一种价格低廉、操作简单、检测快速集载体功能和检测功能于一体的快速检测方法迫在眉睫。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明的一个目的是提供一种基于氧化石墨烯光热效应的温度计快速检测方法。本发明是利用温度计作为载体，基于纳米材料的光热效应组建的灵敏、快速的目标待测物检测方法。温度计(约60元)既作为实验载体，同时可以对光热效应产生的温度变化进行读数，简化了操作步骤，也极大地降低了检测成本，有助于检测方法的广泛应用。

本发明的第二个目的是提供一种温度计水银头表面抗体的偶联方法。将目标待测物抗体修饰到温度计水银头表面使其可以特异性捕获目标待测物，为提高检测方法的灵敏度奠定基础。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

本发明提供一种集检测载体与信号产生于一体的温度计水银头表面抗体的偶联方法，包括以下步骤：

(1)温度计表面预处理

先用清洁剂清洗温度计水银头表面，除去表面污垢，然后用去离子水清洗，干燥至无水后，将温度计水银头置于Piranha溶液中超声，用大量的去离子水清洗至水银头表面pH为中性，干燥；待温度计恢复至室温后，将其浸入3-氨丙基三乙氧基硅烷((3-aminopropyl)triethoxysilane,APTES)甲醇溶液中反应；然后用甲醇冲洗温度计水银头，洗去残留的APTES，将温度计放置于烘箱中烘干；

(2)温度计水银头表面抗体的偶联