[发明专利]一种重组鸡长效干扰素γ及制备此长效干扰素γ的融合蛋白及其制备方法

说明书

本发明公开了一种重组鸡长效干扰素γ及制备此长效干扰素γ的融合蛋白及其制备方法，所述融合蛋白由鸡白细胞介素2与鸡干扰素γ经柔性linker连接而形成，融合蛋白与冻干保护剂混配后经冷冻干燥即可得到重组鸡长效干扰素γ。所述重组鸡长效干扰素γ可显著提高鸡干扰素的半衰期，较普通鸡干扰素γ的半衰期提高13倍以上，并具有广谱抗病毒作用并能提高鸡自身的免疫应答。

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及一种重组鸡长效干扰素γ及制备此长效干扰素γ的融合蛋白及其制备方法。

背景技术

近年来，随着养殖业的规模化和畜禽及其产品流通业迅速的发展，我国家禽业取得长足发展，形成了年产值逾千亿元的巨大产业。然而由于我国薄弱的动物防疫体系，禽病仍然是我国家禽生产面临的严重问题，这已经成为制约我国禽类养殖业发展的重要因素。禽病多、损失大，死亡率高于15％，死淘率达20％～25％(发达国家不足5％)，我国养鸡业每年由于传染病所导致的鸡只死亡数量约为3亿只，直接造成的经济损失约30亿元，造成的间接损失约100亿元。

目前对于鸡病毒性疾病的预防和治疗主要采用的是疫苗免疫和药物治疗，由于疫苗免疫的血清型单一，病毒血清型众多且病毒毒株变异速度快，从而经常导致疫苗免疫失败。尽管一些抗生素和化学合成的抗病毒药物对少数病毒有一些作用，但由于药物残留经食物链给人类健康带来负面影响，我国从16年开始明令禁止一些抗生素和抗菌剂在养殖业中的应用。因此，积极研制生产无毒副作用、无药物残留和不产生耐药性的干扰素制剂，对目前鸡病毒性疾病预防和治疗困境有着重要的临床意义。

IFN是一类病毒感染诱导机体产生具有广谱抗病毒、抗肿瘤和具有免疫调节作用的蛋白质，1957年Issacs和Lindeman首先发现，它是一类多功能的细胞因子，与细胞受体结合后，可诱导机体产生多种特异性蛋白质和酶类，主要通过抑制病毒基因转录和降解病毒RNA来抑制病毒的生长繁殖以及发挥抗肿瘤等的活性。按照IFN的产生细胞、生化特征及在机体免疫方面所发挥作用的不同，分为γ、β、γ三类。现已知，γ型IFN是由激活的T细胞和NK细胞产生，具有较强抗病毒和免疫调节功能。大量研究表明，干扰素γ除了具有广谱抗病毒功能外，对免疫系统也起着关键的调节作用，所以IFN-γ又称为免疫调节干扰素。虽然各种类型的干扰素均能够介导细胞对病毒感染的反应，但干扰素γ的免疫调节活性在协调免疫反应和确定机体长期的抗病毒状态中发挥更为重要的作用，因此干扰素γ具有极为重要的临床应用价值。

细胞因子IL-2即白细胞介素2，又名T细胞生长因子。主要由活化的T淋巴细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子，既可以促进淋巴细胞增殖，增强免疫功能，又能限制T细胞反应而增强机体的免疫耐受，故可用于治疗肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病。在兽医中，由于IL-2能提高疫苗的免疫应答和减少疾病的发生，也出现广阔的应用前景。IL-2因能增强机体的免疫水平，提高机体的抗病能力，因而用于细菌性、病毒性和寄生虫性疾病的免疫治疗。此外，IL-2还可影响药物的代谢，使药物的代谢时间延长，作用时间增加，从而提高药物疗效。IL-2与其他细胞因子根据基因构建，组成融合蛋白，以增强疫苗的抗体产生和提高细胞免疫水平。

天然干扰素及人工重组干扰素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般为2-4个小时。半衰期短给治疗带来了极大的不便，治疗次数的增加，相应的时间成本及经济成本随之增加，而机体的耐受极限也有可能被突破导致不良反应的产生。半衰期短的主要原因有两个：干扰素的分子量过小在体内代谢过快，干扰素尤其是重组干扰素亲和力较差被免疫系统清除。而市面上常见的长效干扰素以聚乙二醇融合干扰素为代表，仅在分子量的层面上部分解决了干扰素分子量小而导致半衰期短的问题，同时聚乙二醇融合干扰素成本非常高，不利于临床上应用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种重组鸡长效干扰素γ及制备此长效干扰素γ的融合蛋白及其制备方法，所述重组鸡长效干扰素γ可显著提高鸡干扰素的半衰期，较普通鸡干扰素γ的半衰期提高13倍以上，并具有广谱抗病毒作用并能提高鸡自身的免疫应答。