[发明专利]一种利用腺病毒载体构建小肠降表达胰岛素大鼠模型的方法在审
申请号: | 201810727184.X | 申请日: | 2018-07-05 |
公开(公告)号: | CN108795984A | 公开(公告)日: | 2018-11-13 |
发明(设计)人: | 郭刚;张瑞;孙蓓;陈皓 | 申请(专利权)人: | 天津医科大学 |
主分类号: | C12N15/861 | 分类号: | C12N15/861;C12N15/113;C12N15/85;A01K67/027 |
代理公司: | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人: | 朱红星 |
地址: | 300070 *** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 腺病毒载体 小肠 大鼠 胰岛素 构建 大鼠模型 大鼠胰岛素 胰岛素基因 动物模型 反义mRNA 口服糖 灌胃 转染 糖尿病 携带 治疗 应用 开发 | ||
1.一种利用腺病毒载体构建小肠降表达胰岛素大鼠模型的方法,其特征在于包括如下的步骤:
(1)腺病毒载体的构建:
大鼠小肠降表达胰岛素的腺病毒载体设计,共设计了两个含大鼠胰岛素反义mRNA载体;
Ins1 Primer:
Forward: cgGGATCCatggccctgttggtgcact
Reverse: cCGGAATTCTTAGTTGCAGTAGTTCTCCAGctg
BamHI GGATCC
EcoRI GAATTC
Ins2 Primer:
Forward: CGGGATCCatggccctgtggatgcg
Reverse: CCGGAATTCctagttgcagtagttctccagc gaattccgg
BamHI GGATCC
EcoRI GAATTC
(2)腺病毒载体转染大鼠小肠的方法
1)T2DM大鼠模型的建立:
利用随机数字表法,在55只SPF级雄性SD大鼠中,随机取40只作为高脂组剩于15只为对照组;高脂组大鼠高脂喂养4周后,进行胰岛素耐量实验以确定是否诱导出胰岛素抵抗,当确定诱导出胰岛素抵抗之后尾静脉注射STZ(30mg/kg),3天后检测大鼠的随机血糖,随机血糖≥16.7mmol/L即为造模成功;
2)将降表达Ins1和Ins2腺病毒载体灌胃给正常SD大鼠:
从造模成功的大鼠中,挑选血糖、体重较为均一的大鼠进行实验,于注射STZ后第2周进行灌胃腺病毒操作,实验组灌胃抑制小肠分泌胰岛素的腺病毒载体,对照组灌胃空载体,将实验组与对照组灌胃后,以及实验组灌胃前后糖代谢状况进行比较分析;将降表达Ins1和Ins2腺病毒载体,给正常SD大鼠灌胃,同时加入抑制胃酸药物洛赛克,大鼠350g体重每次灌胃的药的剂量31ug,观察大鼠小肠胰岛素降表达模型的糖脂代谢变化。
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