[发明专利]一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法

权利要求书

1.一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、mPlum基因表达盒的获得；

B、小麦致死基因Ki的扩增；

C、水稻MSP1盒的获得；

D、小麦花粉特异性启动子Pg47的扩增；

E、各基因表达元件的连接。

2.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤C、水稻MSP1盒的获得，进一步的包括：

提取水稻植株的基因组DNA，以基因组DNA为模板，以F3/R3为上下游引物进行完整MSP1基因表达盒的扩增，扩增过程中分别在上游引物和下游引物中引入Sma I和Sal I酶切位点，其扩增的水稻MSP1基因包含其上游的启动子和下游的终止子，同时包含所有的外显子和内含子。

3.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤A、mPlum基因表达盒的获得，进一步包括：

以含有mPlum基因完整表达盒的质粒为模板，以F1/R1为上下游引物进行扩增，扩增过程中分别在上下游引物中引入AcsI和Kpn I位点，同时在下游引物引入的Kpn I位点前面加入Msel酶切位点。

4.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤B、小麦致死基因Ki的扩增，进一步包括：

以小麦基因组DNA为模板，以F2/R2为上下游引物进行小麦致死基因Ki的扩增，在上下游引物中引入Msel酶切位点；其扩增的致死基因Ki包含所有的外显子和内含子。

5.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤D、小麦花粉特异性启动子Pg47的扩增，进一步包括：

以小麦基因组DNA为模板，以F4/R4为上下游引物进行花粉特异性启动Pg47扩增，在上下游引物中分别引入Kpn I和Sma I酶切位点。

6.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：

第一步，将mPlum基因表达元件连接到pCAMBIA1300载体上；

第二步，将完整的水稻MSP1基因引入第一步中已经引入mPlum基因表达元件的pCAMBIA1301载体上；

第三步，将小麦致死基因Ki连入到已经连有mP1um基因表达元件和水稻MSP1基因的pCAMBIA1301双元载体上；

第四步，将小麦花粉特异性启动Pg47连接到前三步已经连接上mPlum基因表达元件、水稻MSP1基因和小麦致死基因Ki的复合载体上。

7.一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，应用水稻MSP1基因表达盒构建如权利要求1～6中任一项所述方法制备的水稻不育系。

8.一种如权利要求1～6中任一项所述方法在水稻遗传育种中的应用。