[发明专利]一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法在审
| 申请号： | 201810728704.9 | 申请日： | 2018-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN108949777A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 张国栋;刘佳音;米铁柱;万吉丽;徐春莹;葛序娟 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市李*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 不育系 基因表达元件 转基因水稻 小麦花粉 杂合体 扩增 基因 特异性启动子 基因表达盒 水稻 分离定律 基因连接 连锁基因 致死基因 自交结实 表达盒 引入 育性 培育 后代 申请 | ||
1.一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、水稻MIL1基因表达盒的获得；
B、mCherry基因表达盒的获得；
C、小麦花粉特异性启动子Pg47的扩增；
D、小麦花粉致死基因Ki的扩增；
E、各基因表达元件的连接。
2.根据权利要求1所述一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，包括：
第一步，将完整的水稻MIL1基因连接到pCAMBIA1390载体上；
第二步，将mCherry基因表达元件引入第一步中已经引入MIL1基因的pCAMBIA1390载体上；
第三步，将小麦花粉特异性启动Pg47连入到已经连有水稻MIL1基因和mCherry基因表达元件的pCAMBIA1390双元载体上；
第四步，将小麦花粉致死基因Ki连接到前三步已经连接上水稻MIL1基因、mCherry基因表达元件和小麦花粉特异性启动Pg47的复合载体上。
3.根据权利要求1所述一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：
第一步，利用上下游引物中引入的SmaI和AceI酶切位点和pCAMBIA1390双元载体上SmaI和AceI酶切位点，将MIL1基因连接到pCAMBIA1390载体上。
4.根据权利要求1所述一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：：
第二步，连接mCherry基因表达盒，利用上下游引物中引入的Msel和KpnI酶切位点和pCAMBIA1390双元载体上的Msel和KpnI酶切位点，将完整的mCherry基因表达元件引入第一步中已经连接有MIL1基因的pCAMBIA1390载体上。
5.根据权利要求1所述一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：：
第三步，利用上下游引物中引入Kpn I和Sma I酶切位点和pCAMBIA1390双元载体上的Kpn I和Sma I酶切位点，将小麦花粉特异性启动子Pg47连入到已经连有MIL1基因和mCherry基因表达元件pCAMBIA1390双元载体上。
6.根据权利要求1所述一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：：
第四步，利用上下游都引入的DraI酶切位点，将小麦花粉致死基因Ki通过单酶切位点连接到前三步已经连接MIL1基因、mCherry基因表达元件和小麦花粉特异性启动子Pg47的复合载体上。
7.一种基于MIL1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，应用水稻MIL1基因表达盒构建如权利要求1～6中任一项所述培育方法制备的水稻不育系。
8.一种如权利要求1～6中任一项所述培育方法在水稻遗传育种中的应用。
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