[发明专利]与陆地棉AS98矮化性状紧密连锁的分子标记及应用

说明书

本发明属于分子生物学领域，公开了一种与陆地棉AS98矮化性状紧密连锁的分子标记及应用，该分子标记位于D12染色体上，使用该分子标记的特异性引物对能扩增出120bp的产物，所述特异性引物对正向引物序列如SEQ ID No.1所示，所述特异性引物对反向引物序列如SEQ ID No.2所示。本发明找到了鉴别陆地棉矮化材料AS98突变体及野生型的一对引物。在陆地棉AS98与野生型LHF10构建的F2群体中能解释90％以上的表型变异。可用于陆地棉AS98矮化品种的分子标记辅助选择以及图位克隆，为揭示棉花矮化机理、培育矮化新品种提供一定的理论依据。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种与陆地棉AS98矮化性状紧密连锁的分子标记。

背景技术

植物矮化是重要的农艺性状。矮化品种具有抗倒伏能力强、适宜密植及机械化管理等特点,对于减少劳动强度、提高肥料利用率和提高产量具有重要意义，矮化突变体在矮化育种中具有重要的利用价值，同时也是研究植物茎的生长及激素调控的重要基因资源。

棉花具有无限生长习性，植株高大。当前，世界上大多数产棉国，广泛采用化学抑制剂缩节胺控制棉花生长，使株高普遍控制在90-100cm左右。尤其是自我国新疆“密、矮、早”种植技术的成功以来，使用化控棉花株高已经成为新疆棉花增产的重要措施。但大量喷施化学抑制剂缩节胺费工费事，还带来严重的环境污染问题。棉花是重要的经济作物之一，在世界及我国国民经济中占重要地位，因此，充分利用自然矮源，选育矮杆品种仍然是提高产量、提高农业生产效率的重要措施。

本课题1998年在陆地棉廊黄1号与野生棉黄褐棉杂交选育12世代的材料LH_F10中，发现一个自然矮化突变体，1998-2005年通过自交纯化，暂命名“AS98”。通过构建分离群体实现了AS98矮化性状的粗定位，但并未找到与矮化性状紧密连锁的分子标记。因此在利用陆地棉品种AS98实现棉花的矮化育种中，非常有必要开发一种与矮化性状紧密连锁的分子标记，以在苗期对AS98矮株实现选择，从而加快育种进程。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种与陆地棉矮化性状紧密连锁的分子标记。

本发明的技术方案为：与陆地棉AS98矮化性状紧密连锁的分子标记，该分子标记位于D12染色体上，使用该分子标记的特异性引物对能扩增出120bp的产物，所述特异性引物对正向引物序列为：5'-TCCTCCAATAAAGTTTGTCCCTC-3'(SEQ ID No.1)；所述特异性引物对反向引物序列为：5'-TATAGACTGGAAGCGCGTGAG-3'(SEQ ID No.2)。

与陆地棉AS98矮化性状紧密连锁的分子标记引物在棉花遗传育种上的应用。

进一步地，所述棉花遗传育种是指陆地棉AS98矮化性状鉴定。

进一步地，上述所述应用的具体方法为：提取待鉴定棉花基因组DNA，用序列如SEQID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对提取的DNA进行PCR扩增，如果能扩增出120bp的产物，则表明待鉴定棉花为陆地棉AS98矮化植株。

进一步地，上述所述具体方法中，PCR扩增体系为：基因组DNA50ng，SEQ ID No.1所示的引物、SEQ ID No.2所示的引物均为0.5μl，2×Taq MasterMix酶10μl，ddH₂O根据加入的DNA模板的量调节，总反应体系为20μl；PCR扩增程序为：①95℃预变性5min；②95℃变性30s；③53℃退火30s；④72℃延伸30s；其中②-④10个循环；⑤95℃再变性30s；⑥56℃退火30s；⑦72℃延伸30s；其中⑤-⑦20个循环；⑧72℃终延伸7min；⑨4℃保存扩增产物。

本发明与陆地棉AS98矮化性状紧密连锁的分子标记是通过以下方法获得的。