[发明专利]同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条及其制备方法。该试纸条包括支撑板，硝酸纤维素膜，样品垫，金标抗体垫，吸水纸，检测线T2，检测线T1和质控线，金标抗体垫标记抗PRRSV及CSFV的IgG混合物，检测线T1包被抗PRRSV N蛋白单克隆抗体，检测线T2包被抗CSFV E2蛋白单克隆抗体，质控线包被羊抗鼠IgG。提供了同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条的制备方法。本发明的同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条快速、简便、特异性好，为猪繁殖与呼吸综合征及猪瘟的联合免疫监测和流行病学研究提供技术支撑，对猪病的防控有着重要的意义。

技术领域

本发明涉及动物病毒检测技术领域，具体涉及一种同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条及其制备方法。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproduetive and Respiratory Syndrome，PRRS）是目前世界养猪业危害最为严重的病毒性疾病。感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）后母猪以生殖障碍为特征，主要表现为早产、晚期流产、死胎、木乃伊胎、发热、厌食等，感染的仔猪表现为呼吸道症状，也有神经症状。其在发病过程中会出现两耳皮肤发绀发紫，故又称为“蓝耳病”。 PRRSV有两种主要的血清类型，分别是基因Ⅰ型（欧洲型）和Ⅱ型（美洲型）。Ⅰ型以 Lelystad 株(LV 株)为代表，Ⅱ型以 VR2332 株为代表。感染PRRSV的猪和感染后康复的猪都能排毒。接触感染、精液传播、空气传播是PRRSV的主要传播途径，鸟类、鼠类、人类等运输工其都可能成为本病的媒介。

猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、热性和高度接触的病毒性传染病,该病以流行广、发病率和死亡率高为特征,给养猪业带来惨重损失。该病被国际动物法规列入A类种传染病，被我国动物卫生法规列为一类传染病。

猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟是近年来危害我国养猪业的主要疫病，其中以蓝耳病危害最为严重。在美国及欧洲一些养猪业发达的国家已经采用“疫病净化战略”，即针对一些动物重大疫病如猪口蹄疫、猪瘟等停止使用预防性疫苗,采用严格检疫、监测和净化猪群等措施予以防控。目前，疫苗免疫与疫病监控联用依然是我国猪病防控的主要措施。

酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体或激素的免疫分析技术，具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点，适用于大量临床标本的同时检测。目前国内外己经建立了很多关于PRRSV及CSFV感染检测的ELISA方法；但本申请发明人研究发现，这些检测方法绝大多数都是基于抗体检测的，这种基于抗体检测的方法有一定的局限性；就PRRSV而言，猪感染PRRSV后最早7天才能诱发可检测的抗体，个别猪甚至感染PRRSV 3周后仍然检测不到抗体，这种不能及时检出PRRSV感染的状况给后续采取措施来控制PRRS的大面积爆发造成了一定阻碍。

因此，当前亟需开发出能够在感染早期同时检测PRRSV及CSFV两种猪共患病的新方法，进而避免病毒感染早期而出现的抗体空白现象，以达到对病毒感染的检测更直观、快速、准确的检测目的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条及其制备方法，以期实现操作简单快速，结果清晰易辨，一步多检的早期检测。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

设计一种同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条，包括支撑板，硝酸纤维素膜，样品垫，金标抗体垫，吸水纸，检测线T2，检测线T1和质控线，所述金标抗体垫标记有抗PRRSV和CFSV的IgG混合物，所述检测线T1包被有抗PRRSV N蛋白单克隆抗体，所述检测线T2包被有抗CSFV E2蛋白单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。