[发明专利]单链环状核酸及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201810734128.9 | 申请日： | 2018-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN109161572B | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 梁兴国;安然;崔一笑 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 肖丽 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 链环 核酸 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种单链环状核酸的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
经连接酶连接，使与成环辅助链杂交后的线性核酸两端闭合，得到所述单链环状核酸；
其中，所述线性核酸具有发夹结构，所述发夹结构位于所述线性核酸与所述成环辅助链的杂交处；
所述成环辅助链与所述线性核酸的3’端和5’端互补；
所述发夹距离连接处1-3nt；
所述线性核酸的长度为54-200nt；
所述发夹结构的Tm值高于连接反应温度20-40℃；
将所述线性核酸、成环辅助链、连接酶和连接缓冲液混合为同一连接体系，进行连接反应。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将所述线性核酸进行二级结构模拟，选择稳定的发夹结构作为所述线性核酸的杂交处。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述连接反应的时间为1-5小时。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述连接反应的缓冲液为标准缓冲液的0.1-1倍。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述连接酶为可连接双链DNA、双链RNA或DNA-RNA杂交链中的切刻部分的连接酶。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述连接酶为T4 DNA连接酶、T4 RNA连接酶、T3 DNA连接酶、T7 DNA连接酶或E.coli DNA连接酶中的任意一种。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述线性核酸的浓度为1-100μM。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述线性核酸的浓度为5-50μM。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述线性核酸与所述成环辅助链的摩尔比为1:1-5。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述线性核酸与所述成环辅助链的摩尔比为1:1-3。
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