[发明专利]水稻光敏雄性不育相关基因分子标记方法

权利要求书

1.一种水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

G1.选取水稻不育系HN5s与日本晴杂交组合的F2高可育和高不育单株各6～20株，苗期分别去单株的新鲜叶片，采用CTAB方法提取基因组DNA不育和可育基因池构建采用BSA法；

G2.SSR标记采用水稻SSR随机引物；

G3.PCR扩增；

G4.获得的特异片段克隆；

G5.利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选。

2.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述步骤G2，进一步包括：采用水稻SSR随机引物，选择30条SSR随机引物对不育和可育基因池进行标记。

3.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述SSR-PCR反应体系，进一步包括：25μl反应体积，内含10×PCR反应缓冲液2.5μl、0.5U TaqDNA聚合酶、0.2mmol/L d NTPs、0.5μ mol/L引物、58ng模板DNA。

4.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述SSR-PCR反应体系中，退火温度为45.8℃。

5.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述SSR-PCR扩增程序包括：94℃预变性5min；然后94℃变性30s，45.8℃退火45s，65℃延伸1.5min，35个循环；最后65℃延伸7min，4℃保存。

6.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述步骤G4，进一步包括：采用A-T克隆法，经蓝白斑筛选，电泳检测，将阳性克隆提交测序公司测序。

7.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述步骤G5，进一步包括：利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选，并对筛选到的材料进行大田鉴定，从中进行获得育性稳定、综合性状优良的水稻光敏雄性不育系。

8.根据权利要求1-7中任一项所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述筛选到的片断总共有558个碱基，各个碱基数为：A：215个；C：102个；G：117个；T：124个。

9.一种利用权利要求1-8中任一项所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，筛选到的SSR分子标记对水稻材料进行分子标记的方法。

10.一种如权利要求1-9中任一项所述方法在水稻光敏雄性不育相关基因筛选中的应用。