[发明专利]一种快速观察翠竹胚囊结构的方法

权利要求书

1.一种快速观察翠竹胚囊结构的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取不同发育时期的小穗，固定后，转移至酒精中永久保存；

2)梯度复水后，曙红溶液染色，蒸馏水水洗，再以梯度酒精脱水，无水乙醇中重复数次；

3)将染色好的子房置于水杨酸甲酯和酒精的混合液中过渡，随后转移到纯水杨酸甲酯溶液中透明，最后将样品保存于纯水杨酸甲酯中；

4)将样品置于凹玻片之上，在凹玻片上加少许的水杨酸以及中性树脂，用以封片；在激光扫描共聚焦显微镜下进行分层扫描并获取图像，观察出翠竹胚囊结构。

2.根据权利要求1所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法，其特征在于，步骤1)中，取从孢原细胞开始至成熟胚囊的不同发育时期的小花，固定于70％的FAA之中，体视镜下解剖前从FAA中取出，先用50％的酒精冲洗，随后转移至70％的酒精中备用；在体视镜下解剖分离出发育各阶段子房。

3.根据权利要求1所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法，其特征在于，步骤2)中，经70％酒精-50％酒精-30％酒精-15％酒精-蒸馏水梯度复水，每级30min，随后在10mg/L的曙红染色12-15h；染色结束后用蒸馏水水洗5次；经梯度酒精脱水，每级30min。

4.根据权利要求3所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法，其特征在于，步骤2)中，梯度酒精为：15％酒精-30％酒精一50％酒精-70％酒精-80％酒精-95％酒精-无水乙醇，无水乙醇中重复3次，每级30min。

5.根据权利要求1所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法，其特征在于，步骤3)中，将染色好的样品于水杨酸甲酯和酒精的混合液中停留1h，随后转入纯水杨酸甲酯溶液中透明3次，每次2h，最后将样品保存于纯水杨酸甲酯中，置于4℃冰箱中备用。

6.根据权利要求5所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法，其特征在于，水杨酸甲酯和酒精的体积比为1∶1。

7.根据权利要求1或4所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法，其特征在于，步骤4)中，在Leica SP2激光扫描共聚焦显微镜下用543nm的波长激发的荧光，用2μm的光切片厚度进行分层扫描并获取图像。